Микробиология. Практикум

МИКРОБИОЛОГИЯ

ПРАКТИКУМ

В.Н. КИСЛЕНКО

Москва
ИНФРА-М
2020

УЧЕБНОЕ ПОСОБИЕ

Рекомендовано 
Межрегиональным учебно-методическим советом 
профессионального образования в качестве учебного пособия 
для учебных заведений, реализующих программу 
среднего профессионального образования по специальностям 
36.02.01 «Ветеринария», 36.02.02 «Зоотехния» 
(протокол № 19 от 09.12.2019)

УДК 579(075.32)
ББК 28.4я723
 
К44

Кисленко В.Н.
К44  
Микробиология. Практикум : учебное пособие / В.Н. Кисленко. — 
Москва : ИНФРА-М, 2020. — 239 с. — (Среднее профессиональное 
образование). 

ISBN 978-5-16-016186-0
Учебное пособие состоит из двух разделов. Раздел I «Общая микробиология» содержит сведения о правилах работы в бактериологических 
лабораториях, включает описание основных микробиологических, генетических и иммунологических методов исследования. В разделе II «Возбудители инфекционных болезней» перечислены основные свойства возбудителей болезней, методы их идентификации и дифференциации.
Соответствует требованиям федеральных государственных образовательных стандартов среднего профессионального образования последнего 
поколения.
Для студентов учреждений среднего профессионального образования, 
обучающихся по специальности 36.02.01 «Ветеринария».

УДК 579(075.32)
ББК 28.4я723

Р е ц е н з е н т ы:
Донченко А.С., доктор ветеринарных наук, профессор, научный руководитель Сибирского федерального научного центра агробиотехнологий Российской академии наук, академик Российской академии 
наук;
Логинов С.И., доктор биологических наук, профессор, заведующий 
кафедрой эпизоотологии и микробиологии Новосибирского государственного аграрного университета

ISBN 978-5-16-016186-0
© Кисленко В.Н., 2020

Предисловие

Данное учебное пособие разработано согласно требованиям Федерального государственного образовательного стандарта к содержанию дисциплины «Микробиология».
В результате изучения практического курса дисциплины «Микробиология» студент должен:
знать биологические особенности, морфологию и свойства 
возбудителей инфекционных болезней, токсикозов и токсикоинфекций, передающихся пищевым путем, и микробиоты порчи;
уметь проводить микробиологические исследования с целью 
выявления возбудителей инфекционных болезней, токсикозов 
и токсикоинфекций;
владеть методами индикации и идентификации патогенных, 
условно патогенных микроорганизмов и возбудителей токсикозов 
и токсикоинфекций.
Практический курс дисциплины «Микробиология» направлен 
на формирование следующих профессиональных компетенций:
1) готовность осуществлять лабораторный и производствен ный 
ветеринарно-санитарный контроль качества сырья и безопасности 
продуктов животного происхождения и продуктов растительного 
происхождения непромышленного изготовления для пищевых целей, а также кормов и кормовых добавок растительного происхождения;
2) способность на практике проводить исследования с использованием современных технологий при решении профессиональных задач.

Введение

1. оборудоВаНие Микробиологической  
лаборатории

Для работы в лаборатории необходимы следующие приборы 
и аппараты: биологические иммерсионные микроскопы с дополнительными приспособлениями (осветители, фазово-контрастные 
устройства, темнопольные конденсоры и др.), люминесцентные 
 микроскопы, термостаты, аппаратура для стерилизации, рН-метры, 
аппараты для получения дистиллированной воды (дистилляторы), 
центрифуги, технические и аналитические весы, аппаратура для 
фильтрования (фильтры Зейтца и др.), водяные бани, холодильники, аппараты для изготовления ватно-марлевых пробок, набор 
инструментов (бактериологические петли, шпатели, иглы, пинцеты 
и др.), лабораторная посуда (пробирки, колбы, чашки Петри, матрацы, флаконы, ампулы, пастеровские и градуированные пипетки) 
и др.
В лаборатории существует специальное место для окраски микроскопических препаратов; здесь находятся растворы специальных 
красителей, спирт, кислоты, фильтровальная бумага и др. Каждое 
рабочее место снабжено газовой горелкой или спиртовкой, банкой 
с дезинфицирующим раствором. Для повседневной работы лаборатория должна располагать необходимыми питательными средами, 
химическими реактивами, диагностическими препаратами и другими лабораторными материалами. В крупных лабораториях имеются термостатные комнаты для массового выращивания микроорганизмов, проведения серологических реакций.
Для выращивания, хранения культур, стерилизации лабораторной посуды и других целей предназначена следующая аппаратура.
1. Термостат — аппарат, в котором поддерживается постоянная 
температура. Оптимальная температура для размножения многих 
микроорганизмов — 37°С. Термостаты бывают воздушными и водяными.
2. Микроанаэростат — аппарат для выращивания микроорганизмов в анаэробных условиях.
3. Холодильники, используемые в микробиологических лабораториях для хранения культур микроорганизмов, питательных сред, 
крови, сывороток, вакцин и прочих биологических препаратов при 
температуре около 4°С. Для хранения препаратов, которым нужна 

температура ниже 0°С, предназначены низкотемпературные холодильники, в которых поддерживается температура -20°С и ниже.
4. Центрифуги, которые применяют для осаждения микроорганизмов, эритроцитов и других клеток, разделения неоднородных 
жидкостей (эмульсий, суспензий). В лабораториях используют 
центрифуги с различными режимами работы.
5. Сушильно-стерилизационный шкаф (печь Пастера), предназначенный для воздушной стерилизации лабораторной посуды 
и других материалов.
6. Стерилизатор паровой (автоклав), служащий для стерилизации паром под давлением. В микробиологических лабораториях 
используются автоклавы разных моделей (вертикальные, горизонтальные, стационарные, переносные).
Правила работы в микробиологической лаборатории. Микробиолог имеет дело преимущественно с чистыми культурами микроорганизмов, которые являются потомством одной клетки. Поскольку в воздухе и на поверхности предметов в лаборатории 
(на столах, приборах, инструментах, а также на одежде, руках и др.) 
всегда присутствует множество разнообразных микроорганизмов, 
следует постоянно заботиться о сохранении чистоты изучаемых 
культур. Поэтому при работе в микробиологической лаборатории 
необходимо строго соблюдать определенные правила, одно из которых — поддержание чистоты, включая ежедневную гигиеническую обработку всех помещений.
Для уничтожения микроорганизмов в воздухе и на поверхностях существуют различные способы дезинфекции.
Воздух в лаборатории частично очищают проветриванием. Вентиляция резко снижает численность микроорганизмов в воздухе, особенно при значительной разнице температур снаружи и внутри помещения. Продолжительность проветривания — не менее 30–60 мин.
Наиболее эффективный и часто применяемый способ обеззараживания воздуха — воздействие ультрафиолетовым излучением 
(УФИ), обладающим высоким антимикробным действием и вызывающим гибель не только вегетативных клеток, но и спор микроорганизмов. Из-за слабой проникающей способности УФИ не проходит через обычное стекло и легко поглощается частицами пыли. 
Поэтому для стерилизации в зависимости от степени загрязненности воздуха время облучения составляет от 30 мин до нескольких 
часов.
В качестве источника УФИ используют бактерицидные лампы 
(УФЛ). Излучателем в них служит электрическая дуга, возникающая в парах ртути низкого давления и испускающая линейный 

спектр в ультрафиолетовой области, более 80% энергии которого 
приходится на длину волны 2,5 нм.
Бактерицидная лампа представляет собой стеклянную трубку, 
вмонтированную между двумя электрическими контактами и включаемую в сеть через дроссель. Трубка изготовлена из специального 
стекла, пропускающего все лучи, имеющие длину волны 2,5 нм, 
и задерживающего излучение, у которого длина волны короче 2 нм. 
Следует помнить, что УФИ вызывает острое воспаление роговицы 
глаз с характерным слезотечением и светобоязнью вскоре после облучения. Поэтому, чтобы прямые или отраженные ультрафиолетовые лучи не воздействовали на глаза, применяют защитные очки. 
В небольших помещениях при включенной бактерицидной лампе 
находиться нельзя.
 Пол, стены и мебель в микробиологической лаборатории протирают растворами различных дезинфицирующих веществ. Обработка пылесосом позволяет удалять с предметов пыль и значительную часть микрофлоры. В качестве дезинфицирующих растворов чаще всего используют 0,5–3%-й водный раствор хлорамина. 
Особенно тщательно следует дезинфицировать поверхность столов, 
на которых проводится работа с микроорганизмами. Ее необходимо 
протирать дезинфицирующим раствором как перед началом работы, так и после ее окончания. На рабочем столе недопустимы 
лишние предметы. Все реактивы и растворы должны быть снабжены этикетками и стоять на строго определенных местах. В лаборатории нельзя есть, пить, курить. Работать следует в халатах.
В лабораторных условиях микроорганизмы выращивают на плотных и в жидких питательных средах, которые разливают в пробирки, 
колбы или чашки Петри. Посуду и питательные среды предварительно стерилизуют. Внесение клеток микроорганизмов в стерильную среду называют посевом, или инокуляцией. Посев (или пересев) 
микроорганизмов требует четкого соблюдения определенных правил, 
чтобы предохранить исследуемую культуру от загрязнения посторонними микроорганизмами.
Посевы микроорганизмов в стерильные среды лучше всего осуществлять в особых помещениях — боксах. Бокс представляет собой небольшую изолированную комнату, разделенную перегородкой на две части. В основное рабочее помещение бокса входят через 
тамбур, имеющий раздвижную дверь, что исключает резкое перемещение воздуха и, следовательно, занесение извне посторонней микрофлоры. Оборудование бокса включает стол с легко моющейся 
поверхностью, стул, газовую или спиртовую горелки, бактерицидную лампу, укрепленную в специальном штативе или смонтирован

ную на потолке бокса. В боксе удобно иметь подсобный стол для 
размещения необходимых во время работы предметов. Все оборудование бокса, его стены, пол и потолок периодически моют и протирают дезинфицирующими растворами. Перед работой бокс облучают бактерицидной лампой в течение 40–60 мин.
После посева пробирки или другие сосуды, в которых выращивают микроорганизмы, помещают в термостаты, где с помощью терморегуляторов поддерживается постоянная температура. Посуду 
с культурами микроорганизмов, подлежащими утилизации, подвергают автоклавированию, чтобы убить клетки, и только после 
этого ее моют. В посуду с плотными средами заливают дезинфицирующий раствор, который через сутки удаляют, а посуду моют. Неаккуратное обращение с культурами микроорганизмов приводит 
к возникновению бактериального аэрозоля, представляющего опасность для здоровья сотрудников лаборатории.
Все сотрудники лабораторий, а также кафедр микробиологии, 
аспиранты, студенты, приходящие на занятия и работающие в научных, студенческих кружках, прежде чем приступить к работе 
с заразным материалом (культурами патогенных микробов, трупами экспериментально зараженных животных, выделениями больных животных, кровью и др.), обязаны ознакомиться с правилами 
работы и техники безопасности в ветеринарных бактериологических лабораториях и строго соблюдать их:
 
• в помещение лаборатории входят только в специальной одежде: 
халате, белой шапочке или косынке. Халат должен быть наглухо 
застегнут, волосы убраны под шапочку;
 
• в лабораторию нельзя проносить посторонние вещи, продукты 
питания. Портфели и сумки складывают в специально выделенном месте;
 
• в помещении лаборатории категорически запрещается принимать пищу, пить и курить;
 
• каждому работнику (студенту) под определенным номером выделяют рабочее место, микроскоп и другие принадлежности;
 
• на рабочем месте должно находиться оборудование только для 
выполнения конкретного задания. Обычно это набор красок, 
колба с дистиллированной водой, сливная чашка, банки с чистыми и отработанными стеклами, бактериологическая петля, 
штатив, банка с дезинфицирующим раствором;
 
• перед началом работы необходимо проверить наличие и исправность приборов, посуды, газовых горелок (спиртовок) и пр. 
О замеченных недостатках и неисправностях следует сообщить 
ответственному, а на учебных занятиях — преподавателю;

• во избежание взрыва нельзя зажигать одну спиртовку (или газовую горелку) от другой; пользоваться следует только спичками;
 
• нельзя касаться проводов и контактных частей электросети металлическими и другими предметами;
 
• студенты без ведома преподавателя или обслуживающего персонала не должны включать электроприборы и аппаратуру;
 
• студенты приступают к выполнению задания только с разрешения преподавателя; ход работы должен строго соответствовать изучаемой методике;
 
• каждый сотрудник и студент должны соблюдать опрятность 
в работе, содержать в чистоте рабочее место и оборудование;
 
• материал, используемый на учебных занятиях, принимают 
за особо опасный;
 
• при распаковке материала, присланного для исследования, необходимо соблюдать осторожность: банки снаружи обтирают дезинфицирующим раствором и ставят только на подносы или 
в кюветы;
 
• при исследовании поступившего материала и работе с бактериальными культурами соблюдают общепринятые в бактериологической практике технические приемы, исключающие возможность инфицирования работников;
 
• в процессе изучения возбудителей инфекционных болезней студенты должны усвоить особенности правил техники безопасности при работе с конкретными возбудителями;
 
• вскрытие трупов экспериментальных (лабораторных) животных 
производят в специальной одежде на оборудованном столе с помощью необходимых инструментов, используя для этих целей 
кювету, залитую воском (или парафином). Инструменты после 
вскрытия на стол класть запрещается, их помещают в стакан 
с дезинфицирующим раствором или обжигают над пламенем 
горелки;
 
• при работе с жидким инфицированным материалом используют 
резиновые баллоны, соединенные с пипеткой;
 
• жидкости, содержащие патогенные микроорганизмы, переливают над сосудом с дезинфицирующим раствором;
 
• если в процессе работы патологический материал случайно 
попал на стол, его немедленно удаляют тампоном, смоченным 
дезинфицирующим раствором. При попадании зараженного материала на кожу, конъюнктиву, в ротовую полость принимают 
экстренные меры к его обеззараживанию;
 
• по окончании работы патологический материал, использованные 
культуры микроорганизмов, инструменты и поверхность стола 
обеззараживают;

• в конце занятия бактериальные культуры и другой материал 
студенты должны сдать преподавателю, а рабочее место привести в порядок. Выносить из лаборатории пробирки с культурами, препараты (мазки) и другие предметы категорически запрещается;
 
• патологический материал и бактериальные культуры, необходимые для дальнейшей работы, оставляют на хранение в закрытом рефрижераторе или сейфе;
 
• перед уходом из лаборатории необходимо снять халат, руки 
тщательно вымыть и обработать йодированным спиртом. Выходить за пределы лаборатории в халатах запрещается;
 
• соблюдение правил работы и техники безопасности на учебных 
занятиях по микробиологии контролируют дежурные. С техникой безопасности при работе на кафедре микробиологии студенты знакомятся на первом занятии, о чем расписываются 
в журнале.
Соблюдая перечисленные правила, сотрудник обеспечивает 
в лаборатории стерильность манипуляций и предупреждает возникновение внутри- и внелабораторного заражения.

2. Микробиологическая лаборатория  
По работе с ПатогеННыМи биологическиМи  
агеНтаМи (Пба) III и IV груПП ПатогеННости

Специальная лаборатория должна располагаться в отдельно 
стоящем здании или в изолированной части здания. Запрещается 
размещение лабораторий микробиологического профиля в жилых 
зданиях. Лаборатория должна быть обеспечена водопроводом, канализацией, электричеством, отоплением и вентиляцией.
Под лабораторные комнаты отводят наиболее светлые, просторные помещения, естественное освещение которых должно составлять не менее 110 лк.
Площадь лаборатории делят на заразную зону (помещение или 
группа помещений лаборатории, где осуществляются манипуляции 
с патогенными биологическими агентами и их хранение) и чистую 
зону (помещение или группа помещений лаборатории, где не проводятся манипуляции с ПБА).
В чистой зоне располагаются:
 
• комната (гардероб) для верхней одежды;
 
• помещения для проведения подготовительных работ (препараторская, моечная и др.), приготовления и розлива питательных 
сред;
 
• стерилизационная;

• помещение с холодильной камерой или холодильниками для 
хранения питательных сред и диагностических препаратов;
 
• комната отдыха и приема пищи;
 
• комната для работы с документацией и литературой;
 
• кабинет заведующего;
 
• комната для переодевания в рабочую одежду;
 
• подсобные помещения;
 
• туалет.
В заразной зоне располагаются:
 
• помещение для приема и регистрации материала;
 
• боксированные помещения или помещения, оснащенные боксами биологической безопасности;
 
• комнаты для проведения бактериологических исследований;
 
• комнаты для проведения микологических исследований;
 
• комнаты для проведения серологических исследований;
 
• комната для люминесцентной микроскопии;
 
• комната для проведения зооэнтомологических работ;
 
• комната для гельминтологических исследований;
 
• термостатная комната;
 
• автоклавная для обеззараживания.
Пол всех лабораторных помещений покрывают легко моющимся 
материалом — пластиком или линолеумом, а стены на высоту 170 см 
от пола выкладывают кафельной плиткой или окрашивают в светлые тона масляной краской. Окна и двери помещений заразной 
зоны лаборатории должны быть герметичными. На окна цокольного 
и первого этажей следует устанавливать металлические решетки, 
не нарушающие правил пожарной безопасности. Наличие охранной 
сигнализации не исключает необходимости их установки.
Основное рабочее помещение оборудуют лабораторными столами, шкафами и полками для хранения аппаратуры, посуды и реактивов. Лабораторная мебель в заразной зоне должна иметь покрытие, устойчивое к действию моющих и дезинфицирующих 
средств. Поверхность столов не должна иметь швов и трещин.
Большое значение имеют боксы биологической безопасности 
(БББ), обеспечивающие защиту персонала, материалов и окружающей среды лаборатории. В них проводят всю лабораторную 
работу, связанную с посевом микроорганизмов и изучением их 
свойств, а также работу с животными (заражение, вскрытие), содержат инфицированных животных, осуществляют центрифугирование ПБА, сушку, дезинтеграцию, другие операции с вероятным 
образованием аэрозоля, заражение культуры клеток и куриных эмбрионов, приготовление суспензий.