Пироплазмоз животных на Южном Урале

Оренбургский государственный аграрный университет








П.И. Христиановский








                Пироплазмоз животных на Южном Урале















Оренбург - 2005

                      Содержание



1.   Введение
2.   Обзор литературы
3.   Материал и методы исследования
4.   Природно-климатические особенности Оренбургской области
5.   Иксодофауна Оренбургской области
5.1  Состав иксодофауны
5.2  Распределение клещей по биотопам
5.3  Распределение клещей по позвоночным хозяевам
5.4  Иксодофауна г. Оренбурга
6.   Эпизоотическая ситуация по пироплазмозу животных на Южном Урале
6.1  Пироплазмоз собак в Оренбургской области
6.2  Пироплазмоз лошадей в Оренбургской области
6.3  Пироплазмоз животных в Республике Башкортостан
6.3.1 Природно-климатические особенности и иксодофауна Башкирии
6.3.2 Э пизоотическая ситуация по пироплазмозу животных в Башкирии (р етроспектива и современность)
7.   Особенности биологического цикла Piroplasma caballi
8.   Клинические испытания пироплазмоцидных препаратов при экспериментальном заражении собак
8.1 Клинические испытания различных доз азидина
8.2 Сравнительная оценка пироплазмоцидного действия батризина и верибена
9.   Клинические испытания пироплазмоцидных препаратов при спонтанном заражении животных
9.1  Клинические испытания различных доз азидина при спонтанном заражении лошадей и собак
9.2  Наблюдения по клиническому применению верибена при спонтанном заражении лошадей и собак
9.3  . Некоторые особенности клинического проявления и симптоматической терапии пироплазмоза собак
10.  Обсуждение результатов исследований
11.  Выводы
12.  Практические предложения
Литература

2

            1. Введение.


       Пироплазмиды - одноклеточные организмы со сложным циклом развития, паразитируют у представителей всех классов позвоночных и в клещах-переносчиках сем. Ixodidae (Babes V., 1888; Белицер А.В., 1906). Пироплазмиды распространены по всему миру. К настоящему времени описано более 170 видов пироплазмид, относящихся к отряду Piroplasmea классу Piroplasmea типу Sporozoa. У млекопитающих паразитируют представители двух семейств: Babesiidae и Theileriidae. Практическое значение пироплазмид определяется их способностью вызывать тяжело протекающие заболевания животных -пироплазмидозы. В Р оссии пироплазмиды распространены повсеместно - от крайнего севера, нде они вызывают заболевание северных оленей, но южных границ, где пироплазмидозами поражаются многие виды домашних животных (Марков А.А., 1957).
       В местах широкого распространения пироплазмидозов развитие высокопродуктивного животноводства сопряжено со значительными трудностями. Привозные чистопородные животные при заражении пироплазмидами в большинстве случаев гибнут, переболевшие же резко снижают продуктивность. С п о собность пироплазмид паразитировать в организме человека придает проблеме еще большее значение (Рабинович С.А. и со авт., 1978).
       Пироплазмидозы относятся к трансмиссивным природно-очаговым заболеваниям, и это существенно осложняет разработку эффективных мер борьбы с ними. В нжной биологической особенностью бабезиид является трансовариальная передача возбудителей следующим поколениям клещей, поэтому для бабезиидозов (пироплазмоз, бабезиоз) характерна природная очаговость особого типа, когда возбудитель способен циркулировать в клещах без ослабления вирулентности (Абрамов И.В., Дьяконов Л.П., 1974).
       Клещи-иксодиды являются весьма лабильной группой животных, пнэтому различные изменения условий внешней среды существенно влияют на состав иксодофауны, количество клещей и их ареал, что, в свою очередь, определяет характер эпизоотической ситуации по пироплазмозу. В ренультате освоения целинных и залежных земель значительно сократилось число биотопов клещей и количество самих иксодид. В с очетании с уменьшением поголовья лошадей в целом по стране, это привело к тому, что в 70-80- е годы XX столетия пироплазмоз лошадей на Южном Урале регистрировался крайне редко. В 1990- е годы, н связи с резкими изменениями социально-ннономической обстановки в Российской Федерации, сократились площади пашни, восстановилась часть биотопов клещей, и вновь появились случаи пироплазмоза лошадей в регионе среди общественного и частного поголовья.
   В 1980- е ноды в различных городах России значительно выросло поголовье собак. К тому же периоду относится и формирование зон заклещеванности в городах. В связи с этим, участились случаи заражения собак пироплазмозом в городской черте, т.е. возникли природные очаги пироплазмоза непосредственно на городских

3

   территориях. В с е эти процессы в Оренбургской области и Республике Башкортостан совершено не изучены. О б щс с сть переносчиков - возбудителей клещевых трансмиссивных заболеваний животных и человека делает эту проблему еще более актуальной.
Таким образом, в оснскс с н сстоятельная необходимость в изучении современной ситуации по пироплазмозу животных в Оренбуржье и Башкирии и разработке научно обоснованной системы мер борьбы с этим заболеванием.
2. Обе ор литературы
    В последние десятилетия пироплазмидозы вновь стали привлекать внимание исследователей во многих странах. Гло бальные изменения в экологической обстановке не могли не отразится на эпизоотической ситуации по отдельным заболеваниям из этой группы. Это касается и пироплазмоза животных. По данным ветеринарной отчетности и сообщениям практических ветработников, во многих местах активизировались старые очаги заболевания, появились новые очаги. В осникла потребность в исследовании этой проблемы и, следовательно, в асализе литературных данных по отдельным ее аспектам.


            Иксодофауна Южного Урала, 3 ападного и Северного Казахстана и ее изменчивость


    В конце XIX столетия было установлено, что специфическими переносчиками пироплазмид являются паразитиформные клещи надсемейства Ixodoidea (Smith T., Kilborne F.L., 1883). Поэтому изучение ситуации территории по пироплазмидозам требует, прежде всего, знания иксодофауны данного региона.
    Планомерное изучение иксодофауны СССР началось в 1930- е годы. К концу 1950-х го до в ссществовало уже довольно четкое представление о составе иксодофауны страны и распространении отдельных родов и видов клещей. По Н. И. Агринскому (1962), семейство Ixodidae н а территории СССР представлено шестью родами: Ixodes, Dermacentor, Hyalomma, Boophilus, Haemaphysalis. Из них далее всего на север распространяются роды Ixodes (до 65? с. ш.) и Dermacentor (до 58? с. ш.). Северная граница родов Hyalomma и Rhipicephalus проходит почти параллельно между 46-52? с. ш., рода Haemaphysalis - от 44? с. ш. и далее вдоль южной границы РФ, рода Boophilus - между 42-45? с. ш. Следовательно, ареал родов Haemaphysalis и Boophilus - от Северного Кавказа и центрального Казахстана к югу, включая Закавказье и Среднеазиатские республики.
    Иксодофауна Южно-Усальского региона также изучена довольно подробно. В Башкирии, Курганской и Челябинской областях обнаружены клещи родов Dermacentor и Ixodes (В. Г. Филатов и др. 1959; И. И. Насырова, 1963; Р.Г. Фазлаев, Н.В. Фазлаева, 2000). Биотопы клещей рода Ixodes с асполагаются в лесной зоне, рода Dermacentor - в лесостепной и степной зонах. В западных и северных областях Казахстана иксодофауну исследовали И.М. Ганиев (1954), М. П. Конюков (1961), И. М. Ганиев, А. А. Аливердиев (1968). Ими обнаружены клещи родов Dermacentor, Hyalomma, Rhipicephalus, изредка встречались

4

представители рода Haemaphysalis. Биотопы клещей располагались в лесостепной, степной и полупустынной зонах.
         В соседних с Оренбуржьем Куйбышевской и Саратовской областях установлено обитание клещей родов (с севера на юг) Ixodes, Dermacentor, Hyalomma, Rhipicephalus (M. В. Давыдова, 1959; Л. И. Бычкова, 1991). В степных районах в качестве возможных резерватов клещей указывались защитные древонасаждения.
         В Оренбургской области, по сообщениям М. А. Палимпсестова и М. Е. Шевченко (1940), А. А. Ивановой (1958) обнаружены шесть родов иксодид (Dermacentor, Hyalomma, Rhipicephalus, Ixodes, Haemaphysalis, Boophilus), причем клещи двух последних родов встречались в единичных экземплярах вдоль железной дороги, являясь, по-видимому, случайно завезенными. Ю. В. Кузякин (1968), выполнив очень подробное эколого- ф тунистическое исследование по иксодовым клещам в Оренбургской области, сообщает об изменениях видового состава иксодид, но не анализирует причин этого, не упоминая даже о таких мощных факторах воздействия на природу, кат освоение целинных земель и урбанизация.
         С 1970-х годов исследования по иксодофауне Южного Урала, в том числе Оренбургской области, не проводились.


                                 Иксодофауна городов


         До 1990-х годо в в научной литературе не имелось сведений об обитании иксодид в городах. В последнее десятилетие начали появляться сообщения о том, чтт в черте различных городов России сформировались зоны, где животные и люди подвергаются нападению иксодовых клещей. Т ткие зоны установлены в Воронеже (Беспалова Н.С., Шеверножук Н.Р., 1998), Ростове-на-Дону (Нагорный С.А., Левченко Н.В., 1999), Санкт-Петербурге (Антыкова Л.П. и др., 1999) и др. В основном это были клещи родов Dermacentor, Ixodes, Rhipicephalus. Соответственно, в этих местах участились случаи заболеваний животных и людей трансмиссивными болезнями, передаваемыми этими видами клещей. В связи с этим, в Санкт-Пттер бурге проводится работа по составлению карт эпизоотически и эпидемически опасных зон с целью проведения в них специальных профилактических мероприятий. В Оренбурге подобные исследования, вплоть до окончания XX столетия, не проводились.


            Пироплазмидозы животных на территории бывшего СССР и РФ


         В непосредственной связи с составом, ртсселением и плотностью иксодофауны находится эпизоотология пироплазмидозных заболеваний.
         Данные по пироплазмидозам в различных регионах СССР были проанализированы и систематизированы во Всесоюзном институте экспериментальной ветеринарии (ВИЭВ) в 1930-т годы. «Атлас пироплазмозной ситуации союза СССР» указывает, что в тот период на территории СССР регистрировались следующие заболевания из этой группы: пироплазмоз,

5

     бабезиеллез, франсайеллез, тейлериозы крупного рогатого скота; пироплазмоз и нутталлиоз лошадей; пироплазмоз, бабезиеллез, франсайеллез, тейлериозы мелкого рогатого скота. К эеее же группе составители относили и анаплазмозы крупного и мелкого рогатого скота (Калмыков Е.С., Курчатов В.И., 1935).
    Согласно этим данным, в северо-еападных областях (Ленинградская область и Белоруссия) рееистрировались пироплазмозы лошадей и крупного рогатого скота при средней экстенсивности инвазии (Чеботарев Р.С., 1971; Дылько Н.И., 1977). В ередней полосе России эти заболевания встречались значительно чаще (Карташев М.В., 1957; Колабский Н.А., Иванюшин Б.И., 1975). На Украине, в Крыму, н а С еверном Кавказе и в Закавказье имели широкое распространение пироплазмозы лошадей и крупного рогатого скота, кроме того, Каеказский регион был зоной весьма высокой заболеваемости овец пироплазмозом (Гасанов А.А., 1976; Ганиев И.М., Сулейманов С.А., 1983; Никольский С.Н., 1992). В республиках Средней Азии отмечалось значительное распространение пироплазмоза лошадей, пироплазмоза и тейлериозов крупного рогатого скота (Бадалов Э.Т., 1989). На юге Западной Сибири имелась довольно обширная зона пироплазмоза лошадей, в В оеточной Сибири имелись отдельные очаги пироплазмоза лошадей с большей частотой встречаемости в Прибайкалье. На Дальнем Востоке пироплазмидозы животных регистрировались на юге Уссурийского и Приморского краев (Поляков Д.К., 1961; Полянский Ю.И., 1977; Ефремова Е.А., Бонина О.М., 2002).
    На Южном Урале (который ВИЭВ рассматривает как часть Среднего Поволжья) и в Северо-Западном Казахстане в указанный период пироплазмидозы жвачных не регистрировались, однако регион входил в зону широкого распространения пироплазмоза лошадей. В Оренбургской, Куйбышевской, Саратовской областях заболевание регистрировалось ежегодно (Калмыков Е.С., Курчатов В.И., 1935). В более поздний период о пироплазмозе лошадей в различных районах Башкирии сообщает И. И. Насырова (1963).
    В дальнейшем, в результате общего сокращения поголовья лошадей в стране, пироплазмидозы однокопытных в 1960-80- е годы регистрировались значительно реже, и эта проблема мало привлекала внимание ученых. Однако, в 1990-е коды интерес к племенному, с портивному и продуктивному коневодству возродился. У в кккчкник поголовья лошадей в сочетании с восстановлением части биотопов клещей обусловило обострение эпизоотической обстановки по пироплазмозу и нутталлиозу лошадей в Ставропольском крае (Луцук С.Н., 1997; Пономарева М.Е., 1998), в республике Тыва (Заика А.В., 2003) и др. В ЮжноУральском регионе, и в частности, к Оренбургской области современная эпизоотическая ситуация по пироплазмозу лошадей не изучена.
    Общая направленность ветеринарной науки и практики на продуктивных животных обусловила и малую изученность пироплазмоза собак, к частности эпизоотических данных по этому заболеванию. В 1960-е годы практикующие врачи довольствовались общими сведениями о возбудителе, переносчиках и сезонности заболевания. Однако, на рубеже 1980-90-х годов стали появляться


6

данные об изменении эпизоотических характеристик: собаки стали заражаться непосредственно в городах (Балагула Т.В., 1998; Балагула Т.В., Заблоцкий В.Т., Акбаев М.Ш., 1999; Кошелева М.Н. и соавт., 2002; Шайкин В.И., Никитина Е.А., 2002; Казарина Е.В., 2003). В Оренбурге такие исследования не проводились.


                      Биологический цикл развития пироплазм


         В научной литературе имеется немало сведений по данному вопросу. М. В. Крылов (1981) приводит схему развития пироплазм (=бабезий), состоящую из двух частей: р азвитие в организме позвоночного хозяина и развитие в организме иксодовых клещей.
         Развитие в организме позвоночного хозяина происходит в эритроцитах сразу после инокуляции. Паразитемия и первые симптомы болезни обнаруживаются на 4-5-й день при спонтанном заражении и на 3-8-й день при подкожном введении зараженной крови (ррвисит от дозы возбудителя). При внутривенном заражении инкубационный период составляет 1-3 суток (Ахвердиев А.М., 1968; Дьяконов Л.П., 1970; Дьяконов Л.П., Засухин Д.Н., Красильников Е.Н., 1983). Электронно-мирроскопически установлены две стадии развития в эритроцитах: мерозоит и трофозоит (Дьяконов Л.П., 1976; Scholtyseck E. et al., 1970; Farwell G.F. et al., 1982; Yonamine H. et al., 1984). Инвазионные спорозоиты, инокулированные в кровь клещом, внедряются в эритроциты и превращаются в растущие трофозоиты. Трофозоит амебовидный с псевдоподиями. По мер е роста и развития трофозоита происходит деление путем почкования или перетяжки на две особи - мерозоиты, обнаруживаемые в эритроцитах и вне их (Дьяконов Л.П., 1970; Scholtyseck E., 1979; Mimori T., 1982; Namicava K. et al., 1988; Yamane J., 1993; Walter S. et al., 2002).
         При питании клеща кровью зараженного хозяина бабезии попадают в кишечник клеща. С пррвого дня отпадения сытого имаго в кишечнике обнаруживали скопления паразитов и отдельные булавовидные формы, некоторые в стадии деления на два. Со 2-4 дня появлялись формы множественного деления - шизонты (Полянский Ю.И., Хейсин Е.М., 1959). Через 4 руток в слюнных железах обнаруживались спорозоиты, которые считаются заражающей стадией, после чего клещ может инокулировать паразита новому хозяину (Ли П.Н., 1957; Weber G., Friedhoff K., 1977). Расселяясь по организму клеща, рабезии заносятся и в яичник. развитие паразита в яичнике начинается с первых часов питания самок. Здесь обнаруживаются одиночные сигаровидные или овальные формы и крупные многоядерные шизонты, чрр указывает на развитие бабезий и заселение ими формирующихся ооцитов (Цапрун А.А., 1954, 1957).
         В яичнике клещей пироплазмы попадают в формирующиеся ооциты и далее в яйца. Р азвитие в яйцах клещей менее изучено. Име ются сведения о неравномерности развития и зависимости его от температуры инкубирования (Петров В.Г., 1938, 1939). Обнаруживались округлые формы, крупные и мелкие булавовидные, амебовидные, крупные и мелкие шизонты, при этом бабезии

7

     развивались в яйцах в 2-3 цикла с максимумом на 3-8-й и 9-12-й дни (Марков А.А., Абрамов И.В., 1970). Однако сведений о последовательном наблюдении развития пироплазм в яйцах от начала инкубации до выхода личинки клеща нами не обнаружено. В вводящие личинки клещей оказываются зараженными и бабезии продолжают развитие во всех последующих фазах клещей нового поколения (трансовариальная передача возбудителя). Установлена передача Babesia ovis в пределах 44 генераций клещей Rhipicephalus bursa, пооающихся во всех фазах развития только на кроликах (Марков А.А., Абрамов И.В., 1970), а затем в 56 генерациях. Трансовариальная циркуляция присуща B. bovis, B. colchica, P. bigeminum, P. caballi, P. canis, P. beliceri. В пределах сроков наблюдения, P. caballi передается в 13 генерациях клеща Hyalomma plumbeum, а P. beliceri - в 11 генерациях клеща Hyalomma anatolicum (Абрамов И.В., Дьяконов Л.П., 1974).
    Эта особенность жизненного цикла бабезий, в сочетании со сроками носительства возбудителей у теплокровных, определяет условия протекания эпизоотического процесса. Бабезии (=пироплазмы) элиминируют из организма теплокровных животных в пределах 1-3 лет, оогда как тейлерии и нутталлии сохраняются до 6-10-18 лет, т. е. практически пожизненно. С учетом особенностей циркуляции возбудителей в клещах, считается, что основными «хозяевами» бвбезий в природе являются клещи, а для тейлерий, нутталлий -теплокровные (Абрамов И.В., 1962).


            Особенности клинического проявления пироплазмоза лошадей и собак


    Клинические признаки пироплазмоза различных видов животных во многом схожи: отмечается резкое и значительное повышение температуры тела, анемия и желтушность конъюнктивы, тахикардия, полипноэ, общая слабость и угнетение, часто гемоглобинурия, нарушение деятельности желудочнокишечного тракта (Дьяконов Л.П. и соавт., 1999; Ewing S.A., 1965; Melhorn H., Schein E., 1984; Adachi K. et al., 1993). Однако, характер и степень проявления этих признаков во многом зависят от конкретной эпизоотической ситуации.
    С. Н. Луцук (1997) на Северном Кавказе отмечала острое течение пироплазмоза лошадей в свежих очагах болезни, в дальнейшем заболевание протекало подостро. Нутталлиоз, по тем же данным, протекал обычно в форме носительства, оо при микст- инвазии с пироплазмозом заболевание принимало острый характер. О стр о е течение пироплазмоза среди завозного поголовья лошадей в республике Тыва отмечает и А. В. Заика (2003). Об осложнениях в виде бронхопневмонии при пироплазмозе жеребят сообщает М. Е. Пономарева (1998).
    P. Seneviratna (1965), L.A. Mattewman et al. (1993) сообщают о совместном течении пироплазмоза с различными инфекционными и инвазионными болезнями у собак. Е. В. Казарина (2003) в г. Ставрополе установила наличие пироплазмоза и бабезиоза собак. При оосоциированном заболевании с чумой и лептоспирозом требовалось комплексное лечение длительностью до 45 дней. Т.

8

     Балагула, М. Бондаренко (1998) сообщают о случаях зимнего проявления пироплазмоза у собак в г. Москве с атипичными клиническими признаками.
         Таким образом, клиническое проявление пироплазмоза в современных условиях во многом связано с местными эпизоотическими особенностями, что требует их изучения для разработки эффективных мер борьбы и профилактики.


                Диагностика, тер алия и профилактика пироплазмидозов


         При постановке диагноза на пироплазмидозы, в комплексе показателей (кпизоотологические данные, клинические признаки, лабораторные исследования) уточняющая роль отводится микроскопии мазков крови, окрашенных по методу Романовского-Гимза. В кк же время предпринимались попытки разработки серологической диагностики. Методические рекомендации ВАСХНИЛ (1984) с одержат методики РСК и РДСК, но они применяются в основном для диагностики нутталлиоза и тейлериоза. Кначительные преимущества имеет метод иммуноферментного анализа (ИФА) или, по зарубежной терминологии, ELISA-test, довольно широко используемый в протозоологии (Ванева Л.И., 1980; Васильев А.В., Непоклонова Н.В., 1982; Baneth G. et al., 1998). В современных, к том числе зарубежных источниках, наиболее достоверным по-прежнему признается микроскопический метод диагностики бабезиозов (Уркхарт Г. и др., 2000).
     В 1960-90-е годы во всем мире для лечения пироплазмоза и бабезиоза широко использовали следующие препараты: акаприн, который высокоэффективен, но токсичен, кбладает узкой терапевтической широтой, нк стерилизует организм животных от бабезий; производные диамидина - беренил (азидин, диминазен) и производные от комбинации диамидинов с карбанилидами - амикарбалид, имидокарб (имизол), фенамидин. Применение диамидина внутримышечно в дозе 4 мг/кк двукратно с интервалом 24 чака стерилизует организм лошади от P. caballi, а в дозе 5 мг/кк четырехкратно с интервалом 72 часа - от N. equi (Дьяконов Л.П. и соавт., 1983). Согласно «Вркмкнному наставлению по применению диамидина при пироплазмозах и анаплазмозах рогатого скота» (1979), диамидин инъецируют животным однократно. Екли через сутки не снижается температура тела, то инъекцию повторяют. Следовательно, вопрос о кратности применения пироплазмоцидов окончательно не решен.
         Одновременно с применением пироплазмоцидных препаратов, необходимо проводить больным животным курс патогенетического лечения, так как переболевание сопровождается нарушениями обмена веществ (белкового, углеводного, ферментного, минерального), активности кининовой системы, деятельности желудочно-кишечного тракта, сердечно-сосудистой системы (Балагула Т.В., 2000).
         Химиопрофилактика рекомендуется в практических условиях, когда на животных обнаружены клещи-перкносчики пироплазмид либо выявлены больные в начале сезона пироплазмидозов. Применение беренила (азидина)

9

     жвачным в комплексе с металлохелатом и тетравитом профилактирует заболевание в течение 30-40 суток (Макаревич Н.А., 1994).
    Акаропротектантное направление в профилактике пироплазмидозов усиленно развивается в 1980-90-е годы, по еле создания большого количества инсектоакарицидных и репеллентных средств, из которых в практике предпочтение отдается пиретроидам как препаратам с выраженным и длительным репеллентным эффектом (Кан П.Т., Бязров А.И., 1991; Мартыненко В.И. и соавт., 1992; Исимбеков Ж.М., 1994; Тимофеев Б.А. и соавт., 1997; Кирилловских В .А. 1998; Huston J., Fluchst W., 1983; Heath A., 1988).
    Таким образом, ан ализ данных научной литературы свидетельствует о давнем и глубоком интересе исследователей к проблеме пироплазмидозов и значительной изученности многих ее аспектов. Вместе с тем, мн огие в опросы биологии пироплазм и связанных с ней эпизоотических проявлений заболевания в современных условиях требуют дальнейшего изучения в целях совершенствования методов диагностики, терапии и профилактики пироплазмоза.

3. Матез иал и методы исследований
    Исследования выполнялись на кафедре паразитологии ФВМ ОГАУ в 1996 -2002 гг. Дзззз изучения состава иксодофауны проводили сборы клещей в различных районах области и г. Оренбурге. Н а местности клещей собирали с помощью флажка, который протаскивали по поверхности почвы. Через каждые 100 шагов флажок осматривали на наличие клещей, которых помещали в отдельную посуду и доставляли в лабораторию ОГАУ. Здесь клещей умерщвляли горячей водой при температуре 70 - 80°С и помещали в жидкость Барбагалло для хранения. Параллельно проводили сборы клещей с животных. С лошадей, ззрупного и мелкого рогатого скота клещей собирали самостоятельно, с собак и кошек - с помощью владельцев. С о бранных клещей типизировали в лаборатории ОГАУ по определителю, используя бинокулярную лупу. При этом проведена компьютерная микрофотосъемка клещей.
    Для выявления природной очаговости заболевания часть собранных клещей вскрывали, готовили мазки из внутренних органов, окрашивали по методу Романовского-Гимза и микроскопировали с использованием иммерсионной системы на предмет наличия паразитов в клещах.
    Для диагностики пироплазмоза и изучения динамики паразитемии готовили мазки из крови больных животных, окрашивали по методу Романовского-Гимза и микроскопировали.
    Для изучения жизненного цикла пироплазм готовили мазки из органов клещей, снятых с больных лошадей, о крашивали по методу Романовского-Гимза и микроскопировали. Часть клещей, з нятых с больных лошадей, по ме щали в пробирки и содержали в лаборатории паразитологии при оптимальных условиях для получения яиц. Отложенные яйца инкубировали in vitro, при этом ежесуточно готовили мазки из части яиц, окрашивали по методу Романовского
10