Общая микробиология

Т. Н. Криворотова

Д. М. Пачкунов

Н. А. Иванова

ОБЩАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ

Лабораторный практикум

Йошкар-Ола

2023

УДК 579.2 (075.8)
ББК 28.4я73

К 82

Рецензенты:

канд. техн. наук, доцент кафедры пищевой биотехнологии

Казанского национального исследовательского технологического 

университета З. А. Канарская;

канд. биол. наук, доцент кафедры садово-паркового строительства, 

ботаники и дендрологии Поволжского государственного 
технологического университета Н. В. Турмухаметова

Печатается по решению 

редакционно-издательского совета ПГТУ

Криворотова, Т. Н.

К 82 
Общая микробиология: лабораторный практикум / Т. Н. Криво
ротова, Д. М. Пачкунов, Н. А. Иванова. – Йошкар-Ола: Поволжский 
государственный технологический университет, 2023. – 96 с.
ISBN 978-5-8158-2364-8

Кратко изложены основные теоретические вопросы общей микробио
логии. Дается понятие об устройстве и организации микробиологической 
лаборатории, методах дезинфекции и стерилизации. Рассматриваются приемы и методы микробиологических исследований, овладеть которыми обучающиеся должны в результате выполнения представленных здесь 12 лабораторных работ.

Для студентов бакалавриата очной формы обучения направления 

19.03.01 «Биотехнология», изучающих дисциплину «Общая биология и 
микробиология».

УДК 579.2 (075.8)
ББК  28.4я73

ISBN 978-5-8158-2364-8
© Т. Н. Криворотова, Д. М. Пачкунов,
Н. А. Иванова, 2023
© Поволжский государственный
технологический университет, 2023

ОГЛАВЛЕНИЕ

Предисловие.................................................................................................. 5

Тема 1. Устройство микробиологической лаборатории ...................... 5

Тема 2. Лабораторное оборудование.......................................................11

2.1. Общее оборудование........................................................................11
2.2. Вспомогательное оборудование и инструменты ...........................18

Тема 3. Микроскоп и его устройство. Виды микроскопов 
и техника микрокопирования.................................................................23

3.1. Устройство и работа светового микроскопа ..................................24
3.2. Основные правила работы с микроскопом ....................................26
3.3. Различные методы микроскопии ....................................................28

Тема 4. Организация работы в микробиологической лаборатории.37

4.1 Правила работы и техника безопасности при работе 
в микробиологической лаборатории......................................................37
4.2. Подготовка помещений для работы с микробиологическим 
материалом...............................................................................................39
4.3. Подготовка лабораторной посуды. .................................................40
4.4. Методы и средства стерилизации, применяемые 
в микробиологической практике............................................................44
4.5. Правила работы с автоклавом. ........................................................49

Тема 5. Приготовление питательных сред для микроорганизмов ...52

5.1. Требования, предъявляемые к средам ............................................52
5.2. Классификация питательных сред..................................................54

Тема 6. Приготовление дифференциально-диагностических сред 
для культивирования микроорганизмов..............................................59

Тема 7. Окрашенные и фиксированные препараты 
микроорганизмов...................................................................................... 63

Тема 8. Сложные и дифференцированные методы окраски 
фиксированных препаратов микроорганизмов...................................66

Тема 9. Получение накопительных культур микроорганизмов .......71

Тема 10. Получение чистых культур микроорганизмов.....................74

Тема 11. Количественный учет микроорганизмов ..............................78

Тема 12. Определение чувствительности бактерий 
к антибиотикам..........................................................................................85

Глоссарий .....................................................................................................91
Библиографический список ........................................................................94

ВВЕДЕНИЕ

Дисциплина «Общая биология и микробиология» состоит из двух 

разделов «Общая биология» и «Общая микробиология». Данное учебное 
издание предназначено для выполнения лабораторных работ по разделу 
«Общая микробиология» и призвано помочь обучающимся углубить и 
расширить знание предмета.

Оно содержит информацию, необходимую для подготовки студен
тов к практической работе в микробиологической лаборатории. 

Будущим специалистам в области биотехнологии необходимо знать 

основы микробиологии, изучающей строение, жизнедеятельность, условия, закономерности роста и развития микроорганизмов.

Основной целью данного пособия является ознакомление студентов 

с наиболее важным биотехнологическим оборудованием и материалами, 
приемами и методами микробиологических исследований, которые необходимы при изучении общей микробиологии. 

Каждый раздел книги содержит основные теоретические сведения

по изучаемой теме, цель исследования, описание оборудования и реактивов, методики постановки опыта, перечень контрольных вопросов для самопроверки. В конце представлен глоссарий, где дается разъяснение 
многих специальных терминов и определений.

Настоящее издание соответствует требованиям ФГОС ВО по 

направлению подготовки 19.03.01 Биотехнология и составлено в соответствии с рабочей программой дисциплины «Общая биология и микробиология» с учетом требований к будущим специалистам в данной области. 

Авторы надеются, что изучив представленный здесь материал, сту
денты будут:

•
иметь представление об устройстве микробиологической лабо
ратории;

•
знать общее и вспомогательное оборудование и материалы, ис
пользуемые в микробиологической лаборатории;

•
уметь работать с микробиологическим оборудованием;

•
владеть навыками приготовления питательных сред для культи
вирования микроорганизмов;

•
знать методы окраски микроорганизмов;

•
уметь проводить количественную оценку микроорганизмов и 

смогут использовать полученные знания в практической деятельности.

ТЕМА 1

УСТРОЙСТВО МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ 

ЛАБОРАТОРИИ

Цель работы – изучить устройство микробиологической лаборато
рии и требования к ней, а также рассмотреть действующие в данной области нормативные документы.

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ

Микробиологическая лаборатория – это объект, который может вхо
дить в состав учебного, производственного или научного учреждения и 
выполнить диагностические, исследовательские работы с биологическими реагентами.

В зависимости от выполняемых микробиологических исследований 

различают:

1. Диагностические (клинико-диагностические и санитарно-эпиде
миологические) лаборатории: 

- проводят микробиологическую диагностику инфекционных забо
леваний: выделение и идентификацию возбудителя, выявление иммунологических изменений у больного. На основании результатов лабораторных исследований составляется рациональная схема терапии;

- выполняют бактериологические, вирусологические, микологиче
ские, серологические исследования материала от здоровых людей, работающих в системе здравоохранения, торговли, общественного питания, 
образования, сельского хозяйства и пр.

2. Научно-исследовательские микробиологические лаборато
рии: изучение физиолого-биохимических и генетических особенностей 
микроорганизмов, механизмов и способов получения БАВ и т.д. 

3. Производственная микробиологическая лаборатория (фарма
цевтического производства): осуществляет микробиологический контроль сырья, вспомогательных материалов, готовой продукции, санитарно-гигиенического состояния производственных помещений, технологического оборудования, инвентаря, тары, рук, одежды работающих, а 
также разработку и валидацию методик определения микробиологических показателей, работу с культурами-продуцентами БАВ и т.д. 

4. Специализированные лаборатории, обеспечивающие безопас
ность персонала и невозможность «утечки» патогенных микроорганизмов за пределы лаборатории: работа с возбудителями особо опасных инфекций.

При подборе оборудования для оснащения микробиологической ла
боратории руководствуются следующими нормативными документами:

✓ ГОСТ Р ИСО 7218-2015. Микробиология пищевых продуктов и 

кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям (взамен ГОСТ Р 51446–99. Пищевые продукты. Общие правила микробиологических исследований);

✓ ГОСТ 25336–82. Посуда и оборудование лабораторные стеклян
ные. Типы, основные параметры и размеры.

Специфика микробиологических работ требует, чтобы помещение,

отведенное под лабораторию, было изолировано от жилых комнат, пищевых блоков и других непрофильных производственных помещений.

Помещения микробиологических лабораторий по степени опасно
сти для персонала разделяются на две зоны:

I. «Заразная» зона – помещение или группа помещений лаборато
рии, где осуществляются манипуляции с патогенными биологическими 
агентами и их хранение, персонал одет в соответствующий тип защитной 
одежды.

«Заразная» зона включает:

•
помещения для приёма и регистрации материала;

•
помещения для проведения исследований;

•
термостатная;

•
автоклавная для обеззараживания материала.

II. «Чистая» зона – помещения, где не проводят работу с биологи
ческим материалом, персонал одет в личную одежду.

«Чистая» зона включает:

•
гардероб;

•
комнаты отдыха;

•
комнату для работы с документацией;

•
комнату для надевания рабочей одежды;

•
подсобные помещения (помещения для приготовления питатель
ных сред, моечная, стерилизационная);

•
душевую и туалет;

•
стерилизационную.

Основные требования при устройстве лаборатории:
1) полное изолирование от других помещений;
2) защита от воздействия факторов окружающей среды (пыль, вода,

шум, вибрация и т. д.);

3) должна быть предусмотрена возможность зонирования помеще
ния (для каждого этапа проведения исследования свое место, от приема 
образцов до их последующей утилизации после окончания работ).

Под лабораторные комнаты отводят наиболее светлые, просторные

помещения, естественная освещенность которых должна составлять не 
менее 100 лк (люкс). Стены в этих комнатах на высоту 170 см от пола 
окрашивают в светлые тона масляной краской или покрывают кафелем. 
Пол застилают линолеумом. Такого рода отделка позволяет пользоваться 
при уборке помещения дезинфицирующими растворами.

В каждой комнате должна быть раковина с водопроводной подвод
кой и полкой для бутыли с дезинфицирующим раствором. Во всех помещениях лаборатории должна быть предусмотрена приточно-вытяжная 
вентиляция, с фильтрами тонкой очистки для трехкратного обмена воздуха в сутки, подведена водопроводная вода и обеспечен хороший сток.

В микробиологической лаборатории определяются следующие тре
бования по устройству вентиляции:

•
полная герметичность закрытых окон и дверей;

•
в системе приточной и вытяжной вентиляции устанавливаются 

фильтры;

•
в помещениях, где проводятся эксперименты с живыми патоге
нами, обязательно устанавливаются бактерицидные лампы;

•
кратность воздухообмена должна варьироваться в диапазоне 15
20 – это для грязных зон, для чистых показатель ниже – 10-15.

Обязательна маркировка автоклавов, столов, стеллажей для чистого 

и инфицированного материала. Покрытие лабораторной мебели, поверхности пола, стен и потолка должны быть гладкими и устойчивыми к действию моющих и дезинфицирующих средств.

В каждой лаборатории предусмотрены:
•
микробиологический бокс – изолированное помещение с тамбу
ром (предбоксником) для выполнения работ в асептических условиях;

•
средоварная – помещение для приготовления и хранения пита
тельных сред;

•
стерилизационные – помещения для стерилизации питательных

сред, растворов, посуды;

•
препараторская – помещение для подготовки лабораторной по
суды, ватно-марлевых пробок и т. д.;

•
лабораторные комнаты для микробиологических исследований;

•
моечная, оборудованная для мытья посуды;

•
виварий для содержания подопытных животных [2].

Рекомендуемая схема размещения помещений лаборатории, исполь
зуемой при работе с микроорганизмами, представлена на рисунке 1.1.

Рисунок 1.1 – Рекомендуемая схема размещения помещений (рабочих зон) 

лаборатории: 1–4 – рабочие зоны; 5 – вспомогательное помещение 
(комната анализа результатов); 6 – предбоксник; 7 – вспомогательное 

помещение (комната обеззараживания материала с автоклавом)

(https://skinnier.ru/pcr-laboratoria/)

ПОРЯДОК ВЫПОЛНЕНИЯ ЛАБОРАТОРНОЙ РАБОТЫ

Задание 1. Запишите правила работы в микробиологической лабо
ратории, требования к лаборатории.

Задание 2. Перечислите, какие помещения должны располагаться в 

«чистой» и «заразной» зонах лаборатории.

Задание 3. Изучите нормативные документы в микробиологии. 
Задание 4. Решите ситуационные задачи и заполните таблицу 4.

Задача № 1. Микробиологическая лаборатория при проверке комис
сией получила неудовлетворительную оценку. В лаборатории два входа. 
В ней чисто и уютно, на подоконниках живые цветы, все сотрудники 
были в халатах и тряпичных тапочках. Аптечка экстренной медицинской 
помощи была полностью укомплектована. Стены лаборатории оклеены 
красивыми обоями. Вопрос: За что лаборатория получила «двойку»?

Задача № 2. Студенты во время перемены за столом в учебной ком
нате ели булочки и пили чай. Вопрос: Были ли в действиях студентов 
нарушения личной гигиены или санитарно-эпидемического режима?

Задача № 3. При центрифугировании инфицированного материала 

разбилась пробирка. Вопрос: Опишите ваши действия в подобной ситуации. Как называется эта ситуация? Используя текст учебного пособия, 
заполните таблицу 1.1 «Ситуационная задача».

Таблица 1.1 – Ситуационная задача

№

задачи
Критерий оценки
Допущенные 

ошибки

Требования (как 
должно быть?)

1
2
3

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ

1. Какие виды микробиологических лабораторий Вы знаете?
2. Какие помещения предусмотрены в микробиологической лабо
ратории?

3. Какая микробиологическая лаборатория является лабораторией 

общего назначения?

4. Какие помещения должны располагаться в «чистой» и «зараз
ной» зонах лаборатории?

5. Какие необходимо соблюдать правила работы в микробиологи
ческой лаборатории?