СОДЕРЖАНИЕ МИНОРНЫХ СУБПОПУЛЯЦИЙ Т-ЛИМФОЦИТОВ В ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ДЕТЕЙ С БРОНХОЛЕГОЧНОЙ ПАТОЛОГИЕЙ

multiple regression and correlation analysis results [1] we analyzed 
the association between the functional state of various systems and the 
endogenous concentration of chemical elements and major environmental 
pollutants, the relation between them and the type of adaptive response  
to the current environmental conditions.

Results suggest that even relatively low concentrations of toxic 

elements (lead, mercury, cadmium, arsenic, etc) at background exposure 
in the urban and industrial polluted environment of the Crimean 
peninsula show some significant effects on the functional state of the 
examined systems. And organism’s adaptation to the environment 
increases in case of highly modified environment, especially if a 
complex action of factors is considered, for example, analyzing not the 
impact of the single element, but the effects of the elements’ 
imbalance altogether. Such xenobiotics as persistent organic compounds 
(pesticides) produce stronger effects on functions of the organism. 
Each of the examined systems can be considered as the potential target 
for the pollutants, but their sensitivity significantly varies. Effects 
of heavy metals on the CVS functional state are hidden and could be 
revealed only during functional tests indicating partial or compensated 
adaptation. While electrophysiological characteristics appeared to be 
the most sensitive to changes in the internal content of pollutants, 
suggesting 
that 
the 
evaluation 
of 
early 
adverse 
effects 
of 

anthropogenic influence should be assessed first based on functional 
state of the CNS due to its importance in the adaptation of the 
organism in a relatively rapid anthropogenic modification of the 
environment.

References.
1. Evstafyeva E.V. Environmental  Risk Assessment for Health in 

the Republic of Crimea // Issues of Risk Analysis. 2014, V.11, 
№ 5. P. 30-38.

DOI:10.12737/12344

СОДЕРЖАНИЕ МИНОРНЫХ СУБПОПУЛЯЦИЙ Т-ЛИМФОЦИТОВ 

В ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ДЕТЕЙ С БРОНХОЛЕГОЧНОЙ ПАТОЛОГИЕЙ

М.В. Ефименко, Г.П. Евсеева, Л.А. Ли, Е.Н. Супрун

Хабаровский филиал Дальневосточного научного центра физиологии и 

патологии дыхания – НИИ охраны материнства и детства (директор – д.м.н. 

О.А. Лебедько)
m.efimencko@yandex.ru

Ключевые слова: минорные субпопуляции, бронхолегочная патология, 

дети

В настоящее время определение субпопуляционного состава и фенотипа 

лимфоцитов является важным диагностическим признаком для выяснения 
нарушений, связанных с функционированием иммунной системы. В процессе 
исследований значительно расширились представления о функционировании 
системы иммунитета и появились сообщения, что, в периферической крови и 
органах иммунной системы выявляется популяция дубль-позитивных (D

лимфоцитов), а именно лимфоцитов, имеющих фенотип CD3+CD4+CD8+. До 
недавнего времени считалось, что обнаружение CD4+CD8+ клеток в 
периферической крови считалось связанным с преждевременным выходом 
незрелых лимфоцитов из тимуса или признаком активации цитотоксических 
Т-лимфоцитов [3]. В настоящее время выделяются теории: DP – незрелая 
форма Т-хелперов;
DP
–
высокодифференцированные центральные Т-клетки 

памяти, которые имеют большое значение в развитии реакций адаптивного 
иммунитета в ответ на различные инфекционные агенты, то есть пока не 
существует единой теории, которая охарактеризовала бы их функциональное 
значение для организма [1, 2]. Целью исследования явилось изучение 
содержания
CD4+CD8+ Т-лимфоцитов 
DP-клеток при бронхолегочной 

патологии различного генеза. 

Материалы и методы. Лабораторное обследование включало определение 

субпопуляций Т-лимфоцитов в периферической крови методом проточной 
цитометрии (Becton
Dickinson, США) в автоматизированном режиме учета 

результатов Multytest у 124 пациентов клиники Хабаровского филиала ДНЦ 
ФПД − НИИ ОМиД с диагнозами: внебольничная пневмония (ВП) (n=39), 
бронхиальная астма (БА) (n=27) и врожденный порок развития лёгких 
(ВПРЛ) (n=58) и у 57 здоровых детей, сопоставимых по полу и возрасту. 

Статистическая обработка данных проводилась в редакторе Microsoft

Office Excel 2007. Сравнение выборок  проводилось с использованием tкритерия Стьюдента. Уровень значимости считали достоверным при р<0,05. 
Корреляции 
между 
исследуемыми 
параметрами 
устанавливались 
с 

использованием коэффициента корреляции Пирсона (при р<0,05). 

Результаты исследования свидетельствуют о том, что клеточное звено 

иммунитета у пациентов с ВП в  сравнении с показателями здоровых детей 
отличается достоверным снижением относительных и абсолютных значений Тлимфоцитов (CD3+/CD45+), Т-хелперов (CD4+/CD3+) и цитотоксических 
лимфоцитов (CD8+/CD3+) и стабильной тенденцией к угнетению экспрессии 
антигенных детерминант натуральных киллеров (CD16+56+/CD45+). Развитие 
обострения БА сопровождается лимфоцитозом, на фоне которого количество 
CD3+/CD45+-лимфоцитов снижается за счет уровня CD4+/CD45+-лимфоцитов. 
Определена достоверная отрицательная корреляция (r= -0,82, р<0,05) 
частоты обострений бронхиальной астмы
с экспрессией на поверхностной 

мембране лимфоцитов рецепторов к СD8. При хроническом воспалительном 
процессе, характерном для пациентов с ВПРЛ выявлено увеличение числа 
CD3+CD4+, при менее выраженном повышении значения DP-лимфоцитов (по 
сравнению 
с 
CD4+),
что 
свидетельствует 
об 
увеличении 
сроков 

«дозревания» CD4+CD8+ в CD4+ у детей с ВПРЛ. У пациентов с БА и ВПРЛ 
число DP-лимфоцитов оказалось сниженным по сравнению с контрольной 
группой. При этом у пациентов, страдающих БА, обнаружено повышение 
числа CD3+CD8+ лимфоцитов, что указывает на возможную роль вирусных 
антигенов в индукции заболевания. Вероятно, снижение числа DPлимфоцитов связано с расходованием их в ходе иммунного ответа. Выявлены 
прямые 
корреляционные 
зависимости 
между 
числом 
DP-лимфоцитов 
и 

абсолютным содержанием лимфоцитов (r=+0,95, р<0,05), CD3+ лимфоцитов 
(r=+065 р<0,05), CD4+ лимфоцитов (r=+0,78 р<0,05) и обратная корреляция 
с абсолютным числом CD8+ (r=0,86 р<0,05). На основании выявленных 

корреляций 
можно 
думать, 
что 
повышение 
числа 
DP-лимфоцитов 
в 

исследуемых группах может быть связано с активацией и пролиферацией 
преимущественно СD3+CD4+ лимфоцитов Т-хелперного звена.

Таким образом, установлено увеличение содержания DP-лимфоцитов в 

периферической крови преимущественно у больных острыми инфекциями 
бактериальной 
этиологии 
(ВП) 
и 
снижение 
на 
фоне 
хронического 

воспалительного процесса различного генеза (БА, ВПРЛ). Выявленные 
особенности требуют дальнейшего изучения с целью определения их 
диагностической значимости для оценки и коррекции изменений иммунной 
системы у детей с бронхолегочной патологией.

Список литературы:
1.
Лебедев М.Ю., Шолкина М.Н., Живцов О.П.  // Фундаментальные 

исследования. – 2013. –
№ 12. – С. 45-48.

2.
Lambert C., Ibrahim M., Iobagiu C., Genin C. // J. Clin. 

Immunol. – 2005. – Vol. 25, № 5. – P. 418–427.

3.
Nascimbeni M., Shin E.C., Chiriboga L., Kleiner D.E. et al. 

// Blood. – 2004. – Vol. 104, № 2. – P. 478–486.

OCCURRENCE OF MINOR SUBPOPULATIONS OF T-LYMPHOCYTES IN 
THE PERIPHERAL BLOOD OF CHILDREN WITH BRONCHOPULMONARY 

PATHOLOGY

M.V. Efimenko, G.P. Evseeva, L.A. Li, E.N. Suprun

Khabarovsk Facility of «Far Scientific Centre of Physiology and 

Pathology of Respiration» - Scientific research institute of Mother and 

Child Care (director - M.D. Lebedꞌko O.A.)

m.efimencko@yandex.ru

Keywords: 
minor 
subpopulations, 
bronchopulmonary 
pathology, 

children

Currently, the specification of subpopulation composition and 

phenotype of lymphocytes is an important diagnostic feature that helps 
determine the disorders related to the function of the immune system. 
In order to meet the diagnostic purposes, the information about the 
presence of small subpopulations of lymphocytes and activated cell 
pools is considered more important. Understanding of the immune system 
functioning has enhanced greatly in the process of research. Recently 
there have been reports that a population of double positive (DP, Dlymphocytes) lymphocytes is being revealed in the peripheral blood and 
immune organs. Such lymphocytes have the CD3+CD4+CD8+ phenotype. Until 
recently it has been believed that both CD4 and CD8 lymphocytes appear 
simultaneously in the membrane only at β-step selection while 
developing 
in 
the 
thymus 
[3]. 
Currently 
the 
theories 
are 

differentiated: 
DP-immature 
form 
of 
T-helper 
cells; 
DP-highly 

differentiated central memory T-cells, which are important in the 
development of adaptive immune reactions in response to various 
infectious agents. In other words, there is no consistent theory that 
would describe functional role of lymphocytes for the body [1, 2].

The aim of the study was to examine the content of CD4+CD8+ T
lymphocytes DP-cells in conditions of bronchopulmonary diseases of 

different origin.

Materials 
and 
methods. 
Laboratory 
examination 
included 

determination of subpopulations of T-lymphocytes in the peripheral 
blood of 124 patients from Khabarovsk branch clinic FESC PPR RI MCP and 
of 57 healthy children matched by sex and age. The flow cytometry 
method (Becton Dickinson, USA) with an automated accounting of the 
results (Multytest)
was used. Diagnoses, such as community-acquired 

pneumonia (CAP) (n=39), bronchial asthma (BA) (n=27) and congenital 
malformation of the lungs (CML) (n=58) were detected. Statistical 
analysis was performed in Microsoft Office Excel 2007 editor. 
Comparison of samples was performed using t-test. The level of 
significance was considered significant at p<0.05. Correlations between 
the studied parameters were set with the use of the coefficient of 
Pearson correlation coefficient (p<0.05).

The research findings suggest that cellular component of immune 

system in patients with CAP differs in significant decrease of relative 
and absolute values of T-lymphocytes (CD3+/CD45+), T-helper cells 
(CD4+/CD3+) and cytotoxic lymphocytes (CD8+/CD3+) as compared to 
healthy children. The difference is also in a stable tendency to 
suppression of expressing antigenic determinants of natural killer 
cells (CD16+56+/CD45+).

Development of BA recrudescence is accompanied by lymphocytosis 

which influences the reduction in the number of CD3+/CD45+ lymphocytes. 
The research determined accurate negative correlation (rji=-0,82, 
p<0.05) of the frequency of BA recrudescence with the expression on the 
surface membrane of  lymphocytes receptors for CD8. An increase in the 
number of CD3+CD4+, with a less obvious increase in the values of DPlymphocytes (as compared to CD4+), was revealed in CML patients 
suffering from chronic inflammatory process. Such increase indicates a 
lengthening in terms of "maturing" of CD4+CD8+ in CD4+ in CML children.

The tendency to increase in the number of DP-lymphocytes in 

patients with community-acquired pneumonia (in comparison to other 
groups) was detected. It suggests a greater involvement of CD4+CD8+ in 
immune response in case of acute bacterial infection. Patients with BA 
and CML showed a reduced number of DP-lymphocytes compared to the 
control group. Apparently the decrease in the number of DP-lymphocytes 
is associated with spending them during their immune response. Direct 
correlation 
between 
the 
number 
of 
DP-lymphocytes 
and 
absolute 

lymphocyte level (r=+0,95, p<0,05), CD3+ lymphocytes (r=+0,65, p<0,05), 
CD4+ lymphocytes (r=+0,78, p<0.05) and an inverse correlation with the 
absolute number of CD8+ (r=-0,86, p<0.05) were found. On the basis of 
the identified correlations it can be assumed that the increase of the 
number of DP-lymphocytes in the study groups may be associated with 
activation and proliferation of predominantly CD3+CD4+ lymphocytes of 
T-helper level.

All things considered, an increase in DP-lymphocytes in peripheral 

blood mainly in patients with acute infections of bacterial etiology 
(CAP) and a decrease on the background of chronic inflammation of 
various origins (BA, CML) was established. Detected peculiarities 
require 
further 
investigation 
to 
determine 
their 
diagnostic 

significance for the evaluation and correction of changes in the immune 
system in children with bronchopulmonary pathology.

References:
1.
Lebedev M.Yu., Sholkina M.N., Znivtsov O.P // Fundamental 

Research. – 2013.  № 12. P. 45-48.

2.
Lambert C., Ibrahim M., Iobagiu C., Genin C. // J. Clin. 

Immunol. – 2005. – Vol. 25, № 5. – P. 418–427.

3.
Nascimbeni M., Shin E.C., Chiriboga L. et al., // Blood. –

2004. – Vol. 104, № 2. – P. 478–486.

DOI:10.12737/12345

НОВЫЕ ПОДХОДЫ К ТРЕХМЕРНОЙ ФЛУОРЕСЦЕНТНОЙ ВИЗУАЛИЗАЦИИ 

ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ В МОЗГЕ МЫШЕЙ

Ефимова О.И.*, Анохин К.В.*,**

*НИЦ «Курчатовский институт», **ФГБНУ «НИИНФ им. П.К. Анохина», 

Москва, Россия
efimova_oi@nrcki.ru

Ключевые слова: мозг, экспрессия генов, оптическое просветление, 

LUMOS

Ориентация 
современных 
нейробиологических 
исследований 
и 

биомедицинской диагностики на анализ крупномасшабных нейронных сетей 
[2,4,5] требует разработки новых методов трехмерной микроскопии, 
обеспечивающей визуализиацию всего мозга и его структур с клеточным 
разрешением. Микроскопическая визуализация интактных нейрональных сетей 
в образцах целого мозга требует их оптической прозрачности и 
сохранности их трехмерной структуры, тонкой морфологии и флуоресцентных 
меток. В последнее время был разработан целый ряд методик получения 
оптически просветленных биологических образцов (напр., Scale, CLARITY, 
SeeDB, CUBIC, PARS, iDISCO
и др.) [1,3]. Однако, у каждого из 

предлагаемых способов есть определенные ограничения. Для решения этих 
проблем мы разработали новый просветляющий состав LUMOS (LUminocity 
Maintaining Opticlearing Solution). LUMOS позволяет быстро проводить 
трехмерный 
микроскопический 
анализ 
генетически 
кодируемых 

флюоресцентных белков в целых структурах (гиппокамп, некортекс, 
обонятельные луковицы и др.) фиксированного мозга взрослых мышей. В 
отличие от других способов оптического просветления, при которых 
наблюдается уменьшение или увеличение линейных размеров биологического 
образца, водный раствор LUMOS не вызывает деформации ткани, сохраняя 
нативную трехмерную информацию. LUMOS сохраняет флуоресцентный сигнал 
репортерных 
белков 
в 
интактных 
структурах 
не 
менее 
1 
года. 

Двухстепенчатая процедура оптического просветления LUMOS, не требующая 
дорогих реактивов и оборудования, менее чем за 2 дня позволяет сделать 
образцы мозга равномерно прозрачными для последующей трехмерной 
микроскопии 
с 
клеточным 
разрешением 
и 
автоматического 
подсчета 

флюоресцентно меченых мишеней. Мы показали, что разработанный подход 
позволяет визуализировать флюоресцентные репортерные белки в препаратах 
целого мозга взрослых мышей трансгенных линий Thy1-EGFP, картировать 
локализацию вирусного вектора, кодирующего GFP, трансдуцированного в 
мозг мыши, а также проводить количественный анализ индуцированной новым