Книжная полка Сохранить
Размер шрифта:
А
А
А
|  Шрифт:
Arial
Times
|  Интервал:
Стандартный
Средний
Большой
|  Цвет сайта:
Ц
Ц
Ц
Ц
Ц

Клиническая иммунология, аллергология. Базовые методы

Покупка
Новинка
Артикул: 836838.01.99
Доступ онлайн
400 ₽
В корзину
В настоящем учебном издании описаны некоторые базовые методы, использующиеся в биологических лабораториях различного профиля. Приведены протоколы для самостоятельного определения количества лейкоцитов крови и расчета лейкоформул, выделения мононуклеарных клеток из периферической крови. Для обеспечения безопасности при работе с биологически опасными агентами и гемоконтактными патогенами представлены основные требования техники безопасности и процедуры по ликвидации экстренных ситуаций. Пособие предназначено для студентов, обучающихся по направлению подготовки бакалавров «Биология» (направленность «микробиология и иммунология» и «генетика»).
Клиническая иммунология, аллергология. Базовые методы : практикум / сост. Е. В. Сайдакова ; Пермский государственный национальный исследовательский университет. - ПГНИУ, 2020. - 40 с. - Текст : электронный. - URL: https://znanium.ru/catalog/product/2160293 (дата обращения: 13.07.2024). – Режим доступа: по подписке.
Фрагмент текстового слоя документа размещен для индексирующих роботов. Для полноценной работы с документом, пожалуйста, перейдите в ридер.
МИНИСТЕРСТВО НАУКИ И ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ 

РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Федеральное государственное бюджетное 

образовательное учреждение высшего образования

«ПЕРМСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ 

НАЦИОНАЛЬНЫЙ ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ»

Кафедра микробиологии и иммунологии

КЛИНИЧЕСКАЯ ИММУНОЛОГИЯ, 

АЛЛЕРГОЛОГИЯ

БАЗОВЫЕ МЕТОДЫ

ПРАКТИКУМ

Пермь 2020

Составитель: канд. биол. наук Е. В. Сайдакова

Клиническая иммунология, аллергология. Базовые методы : 

практикум / сост. Е. В. Сайдакова ; Пермский государственный
национальный исследовательский университет. – Пермь, 2020. − 40 с.

В настоящем учебном издании описаны
некоторые базовые 

методы, использующиеся в биологических лабораториях различного 
профиля. Приведены протоколы для самостоятельного определения 
количества лейкоцитов крови и расчета лейкоформул, выделения 
мононуклеарных клеток из периферической крови. Для обеспечения 
безопасности при работе с биологически опасными агентами и 
гемоконтактными патогенами представлены
основные требования 

техники безопасности
и процедуры по ликвидации экстренных 

ситуаций.

Пособие 
предназначено 
для 
студентов, 
обучающихся 
по 

направлению подготовки бакалавров «Биология» (направленность 
«микробиология и иммунология» и «генетика»).

Печатается по решению кафедры микробиологии и иммунологии

Пермского государственного национального исследовательского университета
_______________________________________________________

Учебное издание

Составитель: Сайдакова Евгения Владимировна

Издается в авторской редакции

Компьютерная вёрстка: 

Е. В. Сайдакова

Подписано в печать 17.12.2020. 
Формат 60×84/16. Усл. печ. л. 2,33. 
Тираж 50 экз. Заказ 160

Издательский центр

Пермского государственного

национального исследовательского университета.

614990 г. Пермь, ул. Букирева, 15

Типография ПГНИУ,

614990 г. Пермь, ул. Букирева, 15

© ПГНИУ, 2020
© Сайдакова Е. В., составление, 2020

ОГЛАВЛЕНИЕ

ЗАНЯТИЕ 1. ТЕХНИКА БЕЗОПАСНОСТИ ПРИ РАБОТЕ
С БИОЛОГИЧЕСКИ ОПАСНЫМИ АГЕНТАМИ
В ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРИИ ....................................... 4

Последовательность действий для асептического (безопасного) 
снятия одноразовых перчаток ............................................................... 8
Процедуры по ликвидации экстренных ситуаций в лаборатории ..... 9
Базовые правила для безопасной работы в биологической 
лаборатории .......................................................................................... 11

ЗАНЯТИЕ 2. ДОЗИРОВАНИЕ ЖИДКОСТЕЙ...................................... 12

Строение дозатора................................................................................ 13
Принцип работы дозатора ................................................................... 14
Прямое дозирование ............................................................................ 15
Обратное дозирование ......................................................................... 17
Задания для самостоятельного выполнения ...................................... 18

ЗАНЯТИЕ 3. ЦЕНТРИФУГИРОВАНИЕ ............................................... 19

Рекомендации по использованию центрифуги.................................. 23
Задания для самостоятельного выполнения ...................................... 24

ЗАНЯТИЕ 4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВА И СОСТАВА 
ЛЕЙКОЦИТОВ КРОВИ........................................................................... 25

Подсчет лейкоцитов в камере Горяева............................................... 25
Приготовление, фиксация и окраска мазков крови 
для подсчета лейкоцитарной формулы .............................................. 28
Подсчет лейкоформулы ....................................................................... 31
Самостоятельный подсчет лейкоцитов в камере Горяева ................ 34
Самостоятельное приготовление красящей смеси 
и окраска мазков по методу Романовского-Гимзе ............................ 35
Самостоятельный подсчет лейкоформулы ........................................ 36

ЗАНЯТИЕ 5. ВЫДЕЛЕНИЕ МОНОНУКЛЕАРНЫХ КЛЕТОК 
ИЗ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ........................................................... 37

Протокол для самостоятельного выделения мононуклеарных клеток 
на градиенте плотности диаколла....................................................... 39

ЗАНЯТИЕ 1. ТЕХНИКА БЕЗОПАСНОСТИ ПРИ РАБОТЕ 

С БИОЛОГИЧЕСКИ ОПАСНЫМИ АГЕНТАМИ 

В ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРИИ 

Биологическую 
опасность 
(Biohazard) 
представляют 

биологические агенты, организмы и их токсины, способные при 
передаче по воздуху, при проглатывании и через кровь 
инфицировать человека или любую другую форму жизни. К 
биологическим угрозам относятся прионы, вирусы, бактерии, 
грибы, простейшие, метаболиты этих живых существ, а также 
нуклеиновые кислоты, полученные из патогенных организмов, 
из онкогенов и трансформированных клеточных линий. 

Начиная с 1966 года, по всему миру 

для обозначения биологической опасности 
используется специальный знак (рис. 1), 
основой 
которого 
являются 
круг 
и 

трилистник особой формы. Чаще всего это 
обозначение встречается на ярко-оранжевом 
или красном фоне. 

Гемоконтактные патогены (bloodborne 

pathogens) 
– 
любые 
патологические 

микроорганизмы 
или 
вирусы, 

присутствующие в человеческой крови и способные вызывать 
заболевания 
у 
человека. 
Все 
гемоконтактные 
патогены 

биологически опасны, но не все биологически опасные вещества 
являются гемоконтактными патогенами. 

В лабораторной практике гемоконтактные патогены могут 

передаваться посредством ряда путей, а именно: 

 через проколы кожных покровов контаминированными 

инструментами; 

 через 
контакт 
с 
поврежденной 
кожей 
(порезами, 

царапинами и т.д.); 

 через контакт со слизистыми (глаза, нос, рот, т.д.). 

Рис. 1. Знак 

биологической 

опасности

Гемоконтактные патогены могут присутствовать в таких 

жидкостях человеческого тела, как: 

 кровь; 
 сперма; 
 секреты влагалища; 
 спинномозговая жидкость; 
 синовиальная жидкость; 

 плевральная жидкость; 
 перитонеальная жидкость; 
 амниотическая жидкость; 
 слюна (если в ней есть следы 

крови). 

Опасными «по умолчанию» считаются любые жидкости 

человеческого тела, визуально содержащие кровь, или те 
жидкости, происхождение которых невозможно установить. 

Потенциально опасными являются: 

 химически незафиксированные ткани и органы человека 

(кроме неповрежденной кожи); 

 клетки 
и 
тканевые 
культуры 
человеческого 

происхождения; 

 культуральные среды или растворы, в которых могут 

присутствовать клетки человеческого происхождения; 

 животные и ткани животных, которые могут содержать 

гемоконтактные патогены. 

Если нет видимых следов крови, то НЕ считаются 

опасными: 
 моча; 
 кал; 
 рвотные массы; 
 слезы; 

 пот; 
 слюна; 
 мокрота; 
 носовые секреты.

Следует помнить, что при работе с ЛЮБЫМИ образцами 

человеческого происхождения ВСЕГДА следует соблюдать 
меры предосторожности! 

Согласно 
современным 
представлениям 
тератогены, 

мутагены и канцерогены не представляют биологической 
опасности. Это химически опасные вещества и их утилизация 
производится согласно соответствующим правилам. В случае 
загрязнения, биологически опасные вещества должны быть 
обезврежены перед началом утилизации химически опасных 
веществ. 

Ткани животных и человека, зафиксированные в растворе 

формальдегида, 
считаются 
обезвреженными. 
Исключение 

составляют прионы, сохраняющие свои негативные свойства 
при использовании этого метода фиксации.  

Все биологически опасные вещества можно разделить на 

четыре группы, согласно степени их патогенности (т.н. группы 
риска). Представленная ниже классификация предложена 
всемирной организацией здравоохранения для лабораторной 
работы. 

1 группа. Вещество не вызывает болезни у взрослых и 

представляет минимальную угрозу для окружающей среды. 

2 группа. Вещество способно вызывать болезнь у 

здоровых взрослых. Редко, но вызываемое заболевание может 
быть серьезным. Доступны методы профилактики или лечения 
болезни. Несет умеренный риск для окружающей среды. 

3 группа. Вещество может вызывать серьезное или 

смертельное заболевание. Меры профилактики и лечения 
заболевания 
могут 
быть 
доступны. 
Высокий 
риск 
для 

окружающей среды. 

4 группа. Вещество может вызывать серьезные или 

смертельные заболевания. Методы предотвращения или лечения 
болезни недоступны. Представляет серьезную угрозу для 
окружающей среды. 

В России существует своя классификация патогенности 

организмов. Основное ее отличие – это обратный порядок 
увеличения опасности: организмы наиболее высокой степени 
патогенности отнесены к 1 группе. Также в России приняты 
Санитарные 
Правила, 
устанавливающие 
требования 
к 

организационным 
и 
профилактическим 
мероприятиям, 

направленным 
на 
обеспечение 
личной 
и 
общественной 

безопасности, защиту окружающей среды при работе с 
патогенными биологическими агентами: 

 СП 1.3.2322–08 регламентирует работу с организмами III–

IV групп патогенности (согласно классификатору РФ); 

 СП 1.3.3118–13 регламентирует работу с организмами I–II 

группы патогенности (согласно классификатору РФ). 

Для снижения риска при работе с биологически опасными 

веществами используются инженерно-технические средства 
контроля и средства индивидуальной защиты. Они включают в 
себя: 

 ламинарные боксы; 
 вакуумные ловушки; 
 средства 
для 
безопасной 
утилизации 
острых 

инструментов; 

 заглушки и колпачки для игл и скальпелей; 
 твердые контейнеры для утилизации материалов; 
 лабораторные халаты; 
 одноразовые перчатки; 
 защитные очки, щитки и т.д. 

Ламинарные 
боксы 
разной 
степени 
безопасности 

обеспечивают защиту персонала от повреждающих агентов, 
защиту окружающей среды от опасных веществ, а также 
защищают 
вещества 
внутри 
бокса 
от 
контаминаций. 

Большинство лабораторий оснащены боксами биологической 
безопасности 1 и 2 класса. Безопасную работу оператора с 
наиболее опасными веществами обеспечивает бокс 3 класса 
безопасности. 

Последовательность действий для асептического 

(безопасного) снятия одноразовых перчаток 

Стянуть 
перчатку 
с 

одной руки, держась за 
ее основание. 

Держа снятую перчатку 
в 
защищенной 
руке, 

двумя 
пальцами 

свободной 
руки 

стянуть 
вторую 

перчатку. 

Продолжая 
стягивать 

вторую 
перчатку, 

вывернуть 
ее 

наизнанку, 
оставив 

первую 
перчатку 

внутри. 
Выбросить 

перчатки 
в 

соответствующий 
контейнер. Тщательно 
вымыть руки. 

Рис. 2. Метод асептического снятия одноразовых перчаток 

Процедуры по ликвидации экстренных ситуаций 

в лаборатории 

Колотые раны, порезы и царапины. Пострадавшему 

следует снять защитную одежду, вымыть руки и пораженную 
зону. Позволить крови некоторое время беспрепятственно 
вытекать из пореза, затем обработать кожу соответствующим 
дезинфицирующим 
средством. 
Обязательно 
сообщить 
о 

происшествии 
старшему 
сотруднику 
лаборатории. 
При 

необходимости, обратиться за медицинской помощью. 

Поглощение потенциально инфекционного материала. 

Следует снять защитную одежду и обратиться за медицинской 
помощью к старшему сотруднику лаборатории. 

Повреждение контейнеров и разлитие инфекционных 

веществ. Незамедлительно сообщить об инциденте старшему 
сотруднику лаборатории. Работу по устранению последствий 
разлива 
следует 
проводить 
в 
перчатках. 
Поврежденные 

контейнеры, а также пролитые биологически опасные вещества 
следует накрыть тканевыми или бумажными полотенцами. 
Через 
полотенца 
место 
разлива 
следует 
полить 

дезинфицирующим раствором и оставить на некоторое время. 
Затем полотенца и поврежденные материалы следует удалить. 
Острые предметы, например осколки стекла, следует брать 
пинцетом. По завершению этих процедур загрязненную зону 
следует протереть дезинфицирующим средством. Многоразовые 
инструменты, 
использованные 
для 
устранения 
разлива 

(пинцеты, совки и т.д.) следует автоклавировать или поместить 
в дезинфицирующий раствор. 

Повреждение пробирок с потенциально инфекционным 

материалом 
в 
центрифугах, 
не 
имеющих 
герметичных 

стаканов. Если во время работы центрифуги произошло или Вы 
думаете, 
что 
произошло 
повреждение 
пробирок, 
мотор 

центрифуги следует выключить и оставить машину закрытой в 
течение 30 минут. Если повреждение обнаружено после 
остановки вращения центрифуги и открытия крышки, крышку 
следует немедленно закрыть и оставить закрытой. В обоих 
случаях следует незамедлительно сообщить об инциденте 

старшему сотруднику лаборатории. При очистке центрифуги 
следует работать в прочных перчатках из толстой резины. Все 
острые осколки следует брать пинцетом и помещать в 
дезинфицирующее средство. Туда же следует поместить 
съемный 
ротор 
центрифуги 
и 
центрифужные 
стаканы. 

Неразбитые 
закрытые 
пробирки 
можно 
поместить 
в 

дезинфицирующее средство в отдельном контейнере и затем 
повторно использовать. Со всеми материалами, которые 
использовались 
для 
чистки, 
следует 
обращаться 
как 
с 

инфекционными отходами. 

Будьте осторожны и соблюдайте технику безопасности 

при работе в лаборатории! 

Базовые правила для безопасной работы 

в биологической лаборатории 

1. Во время работы в лаборатории ВСЕГДА следует носить 

специальную одежду или халат. 

2. При всех процедурах, которые могут сопровождаться 

прямыми или случайными контактами с гемоконтактными 
патогенами 
следует 
надевать 
специальные 
перчатки. 

Предварительно 
следует 
убедиться, 
что 
тип 
перчаток 

(латексные, виниловые или нитриловые) является подходящим 
для защиты от потенциальной угрозы. После использования 
снимать перчатки следует асептически. 

3. Необходимо 
мыть 
руки 
КАЖДЫЙ 
РАЗ 
после 

манипуляций с потенциально опасными веществами, а также в 
конце рабочего дня. 

4. При необходимости можно использовать специальные 

очки или щиток для предохранения глаз и лица от брызг и 
попадания инфицированного материала. 

5. Носить защитную одежду вне лабораторных помещений 

ЗАПРЕЩАЕТСЯ. 

6. Сменная обувь для работы в лабораториях должна быть 

с закрытым носком. 

7. В рабочей зоне лаборатории ЗАПРЕЩЕНО принимать 

пищу, пить, курить, применять косметические средства и 
использовать контактные линзы. 

8. Хранить пищу и напитки в рабочей зоне лаборатории 

ЗАПРЕЩЕНО. 

Доступ онлайн
400 ₽
В корзину