Клиническая иммунология, аллергология. Базовые методы

МИНИСТЕРСТВО НАУКИ И ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ 

РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Федеральное государственное бюджетное 

образовательное учреждение высшего образования

«ПЕРМСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ 

НАЦИОНАЛЬНЫЙ ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ»

Кафедра микробиологии и иммунологии

КЛИНИЧЕСКАЯ ИММУНОЛОГИЯ, 

АЛЛЕРГОЛОГИЯ

БАЗОВЫЕ МЕТОДЫ

ПРАКТИКУМ

Пермь 2020

Составитель: канд. биол. наук Е. В. Сайдакова

Клиническая иммунология, аллергология. Базовые методы : 

практикум / сост. Е. В. Сайдакова ; Пермский государственный
национальный исследовательский университет. – Пермь, 2020. − 40 с.

В настоящем учебном издании описаны
некоторые базовые 

методы, использующиеся в биологических лабораториях различного 
профиля. Приведены протоколы для самостоятельного определения 
количества лейкоцитов крови и расчета лейкоформул, выделения 
мононуклеарных клеток из периферической крови. Для обеспечения 
безопасности при работе с биологически опасными агентами и 
гемоконтактными патогенами представлены
основные требования 

техники безопасности
и процедуры по ликвидации экстренных 

ситуаций.

Пособие 
предназначено 
для 
студентов, 
обучающихся 
по 

направлению подготовки бакалавров «Биология» (направленность 
«микробиология и иммунология» и «генетика»).

Печатается по решению кафедры микробиологии и иммунологии

Пермского государственного национального исследовательского университета
_______________________________________________________

Учебное издание

Составитель: Сайдакова Евгения Владимировна

Издается в авторской редакции

Компьютерная вёрстка: 

Е. В. Сайдакова

Подписано в печать 17.12.2020. 
Формат 60×84/16. Усл. печ. л. 2,33. 
Тираж 50 экз. Заказ 160

Издательский центр

Пермского государственного

национального исследовательского университета.

614990 г. Пермь, ул. Букирева, 15

Типография ПГНИУ,

614990 г. Пермь, ул. Букирева, 15

© ПГНИУ, 2020
© Сайдакова Е. В., составление, 2020

ОГЛАВЛЕНИЕ

ЗАНЯТИЕ 1. ТЕХНИКА БЕЗОПАСНОСТИ ПРИ РАБОТЕ
С БИОЛОГИЧЕСКИ ОПАСНЫМИ АГЕНТАМИ
В ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРИИ ....................................... 4

Последовательность действий для асептического (безопасного) 
снятия одноразовых перчаток ............................................................... 8
Процедуры по ликвидации экстренных ситуаций в лаборатории ..... 9
Базовые правила для безопасной работы в биологической 
лаборатории .......................................................................................... 11

ЗАНЯТИЕ 2. ДОЗИРОВАНИЕ ЖИДКОСТЕЙ...................................... 12

Строение дозатора................................................................................ 13
Принцип работы дозатора ................................................................... 14
Прямое дозирование ............................................................................ 15
Обратное дозирование ......................................................................... 17
Задания для самостоятельного выполнения ...................................... 18

ЗАНЯТИЕ 3. ЦЕНТРИФУГИРОВАНИЕ ............................................... 19

Рекомендации по использованию центрифуги.................................. 23
Задания для самостоятельного выполнения ...................................... 24

ЗАНЯТИЕ 4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВА И СОСТАВА 
ЛЕЙКОЦИТОВ КРОВИ........................................................................... 25

Подсчет лейкоцитов в камере Горяева............................................... 25
Приготовление, фиксация и окраска мазков крови 
для подсчета лейкоцитарной формулы .............................................. 28
Подсчет лейкоформулы ....................................................................... 31
Самостоятельный подсчет лейкоцитов в камере Горяева ................ 34
Самостоятельное приготовление красящей смеси 
и окраска мазков по методу Романовского-Гимзе ............................ 35
Самостоятельный подсчет лейкоформулы ........................................ 36

ЗАНЯТИЕ 5. ВЫДЕЛЕНИЕ МОНОНУКЛЕАРНЫХ КЛЕТОК 
ИЗ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ........................................................... 37

Протокол для самостоятельного выделения мононуклеарных клеток 
на градиенте плотности диаколла....................................................... 39

ЗАНЯТИЕ 1. ТЕХНИКА БЕЗОПАСНОСТИ ПРИ РАБОТЕ 

С БИОЛОГИЧЕСКИ ОПАСНЫМИ АГЕНТАМИ 

В ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРИИ 

Биологическую 
опасность 
(Biohazard) 
представляют 

биологические агенты, организмы и их токсины, способные при 
передаче по воздуху, при проглатывании и через кровь 
инфицировать человека или любую другую форму жизни. К 
биологическим угрозам относятся прионы, вирусы, бактерии, 
грибы, простейшие, метаболиты этих живых существ, а также 
нуклеиновые кислоты, полученные из патогенных организмов, 
из онкогенов и трансформированных клеточных линий. 

Начиная с 1966 года, по всему миру 

для обозначения биологической опасности 
используется специальный знак (рис. 1), 
основой 
которого 
являются 
круг 
и 

трилистник особой формы. Чаще всего это 
обозначение встречается на ярко-оранжевом 
или красном фоне. 

Гемоконтактные патогены (bloodborne 

pathogens) 
– 
любые 
патологические 

микроорганизмы 
или 
вирусы, 

присутствующие в человеческой крови и способные вызывать 
заболевания 
у 
человека. 
Все 
гемоконтактные 
патогены 

биологически опасны, но не все биологически опасные вещества 
являются гемоконтактными патогенами. 

В лабораторной практике гемоконтактные патогены могут 

передаваться посредством ряда путей, а именно: 

 через проколы кожных покровов контаминированными 

инструментами; 

 через 
контакт 
с 
поврежденной 
кожей 
(порезами, 

царапинами и т.д.); 

 через контакт со слизистыми (глаза, нос, рот, т.д.). 

Рис. 1. Знак 

биологической 

опасности