Практикум по общей ветеринарной микробиологии и микологии

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РФ 

ДЕПАРТАМЕНТ НАУЧНО-ТЕХНОЛОГИЧЕСКОЙ ПОЛИТИКИ  

И ОБРАЗОВАНИЯ 

САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ  

УНИВЕРСИТЕТ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ 

 
 

 
 
 
 

 
 

ПРАКТИКУМ  

ПО ОБЩЕЙ ВЕТЕРИНАРНОЙ  

МИКРОБИОЛОГИИ И МИКОЛОГИИ 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

Санкт-Петербург 

2023 

УДК: 579(076.5) 

 

 
Практикум по общей ветеринарной микробиологии и микологии / 

А.А. Сухинин, Л.И. Смирнова, И.В. Белкина, Е.И. Приходько, С.А. Макавчик, В.О. Виноходов ; МСХ РФ, СПбГУВМ. – Санкт-Петербург : Изд-во 
ФГБОУ ВО СПбГУВМ, 2023. – 111 с. 
   
Практикум предназначен для студентов ветеринарных факультетов, 

ветеринарных врачей лабораторий и курсов повышения квалификации, 
проводящих диагностические исследования. Написан в соответствии с новым учебным планом и программой по ветеринарной микробиологии для 
ветеринарных факультетов. В практикуме содержатся современные сведения по бактериологическим методам исследования. Изложение материала 
каждого занятия дается по определенному плану: цель занятия, оборудование и материалы, методические указания по проведению самостоятельной 
работы и контрольные вопросы для самоподготовки. Каждое занятие рассчитано на 2 часа. 

 

 
 

Рецензент: д.в.н., проф. Кузьмин В.А. 

 
 
 

Практикум утвержден на методическом совете  

Санкт-Петербургского государственного университета  

ветеринарной медицины 

(протокол № 9 от 17.11. 2023 года) 

 
 

 

 
 
 
 
 
 
 

© ФГБОУ ВО СПбГУВМ, 2023 г. 

ЗАНЯТИЕ № 1 

Цель занятия. 
1. Ознакомить студентов с техникой безопасности и правилами работы 

в бактериологической лаборатории и на кафедре. 

2. Изучить правила взятия и пересылки патматериала и методы лабо
раторной диагностики инфекционных болезней. 

3. Ознакомить студентов с устройством светового микроскопа и пра
вилами микроскопирования. 

 
Материалы и оборудование.  
 Микроскопы, иммерсионное масло, готовые окрашенные мазки с раз
личными формами микроорганизмов. 

Техника безопасности  

в бактериологической лаборатории  

и на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии 

Сотрудники бактериологической лаборатории и студенты, занимаю
щиеся на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии обязаны 
строго соблюдать следующие правила: 
1. На практических занятиях по микробиологии следует находиться в 

чистом халате светлых тонов с длинными рукавами, защищающем 
обычную одежду, и головном уборе (колпачок, косынка). Халат должен быть застѐгнут, волосы убирают под колпачок. Спецодежду надо 
хранить в специальном пакете, отдельно от других предметов. Для 
практической работы с микробными культурами желательно иметь латексные перчатки. 

2. Нельзя раскладывать посторонние вещи на лабораторных рабочих сто
лах. Сумки, пакеты следует оставлять в специально выделенном месте. 

3. Во время практических занятий запрещается выкладывать на стол и 

употреблять пищевые продукты, любые напитки, жевательную резинку, пользоваться косметикой. 

4. Приступать к практической работе следует только с разрешения веду
щего преподавателя, лаборанта или ветеринарного врача-бактериолога 
кафедры. 

5. При проведении практических занятий в учебной группе студентов 

назначается дежурный, который помогает преподавателю контролировать соблюдение правил техники безопасности, целостность лабораторного оборудования, инструментов, а также следит за порядком и 
чистотой на рабочих местах. 

6. Перед началом практической работы необходимо проверить исправ
ность газового и электрического оборудования, наличие и целостность 
инструментов, лабораторной посуды, микроскопов. Обо всех обнаруженных недостатках надо немедленно сообщить преподавателю или 
лаборантам. 

7. Микроскопы, при необходимости, переносят поддерживая их снизу. 

8. 
При выполнении лабораторно-практических работ необходимо строго соблюдать общепринятые в бактериологической практике правила и приѐмы 
работы с микробными культурами. К исследуемым биологическим материалам и микробным культурам следует относиться как к патогенным.  

9. Во время непосредственной работы с биологическим материалом и 

культурами микроорганизмов не допускаются разговоры, ненужные 
переходы, резкие движения.  

10. Нельзя зажигать газовую и спиртовую горелку от горелки, приподни
мать и переносить зажжѐнные горелки и спиртовки, гасить пламя спиртовки, задувая еѐ (на спиртовку следует осторожно надеть колпачок).  

11. Использованные пастеровские пипетки, предметные стѐкла помещают 

в дезинфицирующий раствор. 

12. Во время работы нельзя держать открытыми пробирки и чашки Петри 

с микробными культурами, дотрагиваться руками до питательной среды в чашках, класть на стол горизонтально пробирки и инструменты. 
Пробирки и инструменты ставят в штативы или специальные стаканчики (бактериологические петли - петлѐй вверх). 

13. О повреждении стеклянной посуды, случайном разбрызгивании, разли
вании исследуемого материала и бактериальных культур необходимо 
немедленно сообщить преподавателю. Стол, одежду, обувь и другие 
предметы и руки, загрязнѐнные исследуемым материалом, подвергают 
тщательной дезинфекции.  

14. После завершения практической работы рабочее место надо привести в 

порядок, микробные культуры, посевы и мазки сдать преподавателю 
или дежурному, руки продезинфицировать, затем снять халат и убрать 
его в специальный пакет. 

15. При умышленном или произошедшем в результате халатности повре
ждении лабораторного оборудования, приборов, инструментов студенты учебной группы несут материальную ответственность. 

После ознакомления с правилами техники безопасности на кафедре 

микробиологии, студенты должны расписаться в соответствующем журнале о необходимости их выполнения. 

Устройство бактериологической лаборатории 

Бактериологическая лаборатория (отдел) входит в состав ветеринарной 

лаборатории. В ней проводят бактериологическую диагностику болезней 
сельскохозяйственных животных, пушных зверей, рыб, пчел, а также ветеринарно-санитарную экспертизу кормов, пищевых продуктов и т.д. 

Материалом для бактериологического исследования служат кровь, 

мокрота, фекалии, моча, молоко от больных, кусочки паренхиматозных 
органов от павших и вынужденно убитых животных, а также пробы объектов внешней среды: воды, воздуха, кормов, почвы и др.; пробы пищевых 
продуктов. 

Для отдела отводят специальное помещение, в котором оборудуют 

бактериологическую комнату, бокс с предбоксником, комнату для приготовления питательных сред, моечную, автоклавную и приемную для исследуемого материала. 

Бактериологические боксы (от англ. Box – коробка, ящик) – изолиро
ванные застекленные камеры, предназначенные для микробиологических 
исследований в асептических условиях. Бокс состоит из предбоксника и 
собственно бокса. В предбокснике хранят комплект спецодежды, запас инструментов, лабораторной посуды, питательных сред, реактивов. В боксе 
оборудуют рабочее место врача-бактериолога. 

 Оборудование рабочего места врача-бактериолога: 

1) спиртовая или газовая горелка;  
2) бутыль с системой слива, наполненная дистиллированной водой;  
3) сливная чаша (полоскательница) с «мостиком»;  
4) набор красок и реактивов;  
5) контейнер с дезинфицирующим раствором для обработки рук (или с 

ватными тампонами, пропитанными 70º этиловым спиртом);  

6) ѐмкость с дезинфицирующим раствором для отработанных стекол, 

пипеток;  

7) контейнер для хранения чистых обезжиренных стѐкол;  
8) набор бактериологических петель разного диаметра;  
9) лупа 5-кратного увеличения;  
10) микроскоп;  
11) фильтровальная бумага для нанесения краски и просушивания 

мазков;  

12) штатив для пробирок;  
13) маркер по стеклу или восковой карандаш;  
14) стерильные (стеклянные или пластиковые одноразовые) пастеров
ские и градуированные пипетки в упаковке. 

Стены, пол, потолок, рабочая поверхность стола в боксе должны быть 

покрыты материалом, который можно легко дезинфицировать. Перед началом работы полы протирают дезинфицирующим раствором, воздух обеззараживают бактерицидными лампами. Работа в боксе проводится в стерильных халатах, защитных масках, тапочках или бахилах, специально предназначенных для бокса. 

У входа в предбоксники и бокс кладут губчатые коврики, пропитанные 

дезинфицирующим раствором. 

В комнате, где готовят питательные среды для выращивания мик
роорганизмов, хранят также стерильную лабораторную посуду: пробирки, 
колбы, флаконы, стаканы, цилиндры, чашки Петри, пастеровские пипетки. 

В моечной обеззараженную посуду кипятят, моют и готовят к стерили
зации.  

В автоклавной стерилизуют питательные среды, посуду, инструменты 

и обеззараживают отработанный инфицированный материал. 

Оборудование бактериологической лаборатории 

Для повседневной работы бактериологическая лаборатория должна 

располагать необходимыми питательными средами, химическими реактивами, диагностическими препаратами, специальными красителями. Нужна 
специальная лабораторная посуда (различные пробирки, колбы, стаканы, 
цилиндры, чашки Петри, матрацы, флаконы, ампулы, пастеровские и градуированные пипетки и др.). 

В лаборатории используют ряд обязательных приборов и инструментов: 
- набор инструментов для манипуляций с микробами (бактериоло
гические петли, шпатели, иглы, пинцеты, скальпели); 

- приборы для микроскопии - биологические иммерсионные микро
скопы с дополнительными приспособлениями (осветитель, фазовоконтрастное устройство, темнопольный конденсор и т.д.), люминесцентный микроскоп;  

- приборы для приготовления питательных сред, растворов (ди
стиллятор, технические и аналитические весы, рН-метры, аппаратура для 
фильтрования, водяные бани, центрифуги); 

- термостаты - аппараты, в которых поддерживается постоянная темпе
ратура. Большинство патогенных микроорганизмов хорошо растут и развиваются при температуре 37-38ºC, патогенные грибы при 24-26ºС. Термостат – это 
металлический двустенный шкаф с теплоизоляционным материалом снаружи. 
Выпускают термостаты суховоздушные и с водяным нагревом. Нужная температура внутри поддерживается с помощью терморегулятора. Для размещения 
посевов внутри термостата имеются полочки. В крупных лабораториях имеются несколько термостатов и термостатные комнаты. Культивирование микробов с анаэробным типом дыхания проводят в эксикаторах, анаэростатах, 
анаэробных термостатах, микроанаэростатах; 

- СО2 - инкубатор - аппарат для создания постоянной температуры и 

атмосферы определенного газового состава;  

- холодильники - бытовые и низкотемпературные в которых можно 

поддерживать температуру от “−“ 20ºС, “−“ 75ºС; 

- центрифуги - с различными режимами работы; 
- аппараты, предназначенные для стерилизации - воздушный стерили
затор ВС (сушильный шкаф, печь Пастера), аппарат Коха, автоклавы 
(паровые стерилизаторы); 

- ламинарные боксы;  
- аппарат для изготовления ватно-марлевых пробок. 

Взятие и пересылка исследуемого материала  

для проведения бактериологического исследования 

Для определения или подтверждения причины болезни или гибели 

животного исследуемый материал отправляют в ветеринарную лабораторию. При его взятии и пересылке руководствуются соответствующими инструкциями по борьбе с болезнями животных, а также следующими правилами: 

- исследуемый материал берут стерильными инструментами в сте
рильную посуду. Место разреза поверхности органа (ткани) прижигают 
нагретой металлической пластинкой - шпателем. Взятые кусочки органов 
(печени, селезенки, лимфатических узлов и др.) помещают в стерильные 
банки, герметично закрывают и помещают в термос со льдом, либо консервируют 30% раствором химически чистого глицерина; 

- кровь, гной, слизь, экссудат, мочу, и другой жидкий исследуемый ма
териал посылают в запаянных пастеровских пипетках, стерильных пробирках, шприцах или во флаконах, закрытых стерильными резиновыми пробками и помещенными в водонепроницаемые ѐмкости; 

- исследуемый материал берут сразу после смерти животного; 
- трупы мелких животных, птиц, абортированные плоды посылают це
ликом, завернутыми в мешковину, предварительно увлажненную дезинфицирующим раствором (лизолом), а затем тщательно упаковывают в плотную деревянную или металлическую тару, для предупреждения распространения возбудителя болезни; 

- на исследуемый материал по специальной форме составляют сопро
водительный документ и посылают в лабораторию с нарочным. 

Схема диагностики инфекционных болезней 

Диагноз на инфекционные болезни ставят, учитывая эпизоотоло
гические данные, клинические признаки болезни, патологоанатомические изменения в органах и тканях и результаты лабораторных исследований. 

Методы исследований в бактериологическом отделе лаборатории 

При исследовании биологического материала на наличие возбудителей 

бактериальных болезней используют бактериологический, серологический 
и молекулярно-генетический методы.  

I. Бактериологический метод включает 
1. Бактериоскопическое исследование – исследование под микроско
пом. Его применяют с целью изучения морфологических особенностей 
микроорганизмов (формы, размера, особенностей внутренней структуры наличие спор, капсул, биполярности; расположения в мазках, подвижности) и их тинкториальных свойств (способности воспринимать тот или 
иной красящий раствор, а также отношение к растворам спиртов, кислот и 
щелочей); 

2. Метод чистых культур или культуральный метод. Его используют с 

целью выделения из исследуемого биологического материала чистой культуры 
возбудителя на искусственных питательных средах, изучения его культурально-биохимических свойств и идентификации. Этот метод также называют собственно бактериологическим методом исследования. 

3. Биологический метод (биопроба). Этот метод необходим для опре
деления патогенных свойств выделенных культур микробов путем заражения лабораторных животных. 

II. Серологический метод – использование принципа взаимодействия 

специфических антигенов и антител. При этом выявляют специфические антитела в сыворотке крови больных или вакцинированных животных, используя 
заведомо известный (биофабричный) антиген; или определяют наличие неизвестного антигена с помощью известных диагностических иммунных сывороток. Можно определить вид и серологический вариант (серотип) микроорганизма, выделенного из патматериала. 

III. Молекулярно-генетический – применяют полимеразную цепную 

реакцию (ПЦР), метод гибридизации (с использованием ДНК или РНК зондов), метод секвенирования и т.д. 

 БАКТЕРИОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД 

Этапы приготовления мазков:  
1 этап - нанесение исследуемой культуры или материала на предмет
ное стекло; 

2 этап – высушивание без нагревания; 
3 этап - фиксация; 
4 этап - окрашивание. 
1-й этап. Нанесение материала: 
- из органов: 
поверхность органа прижигают раскаленным шпателем и делают разрез 

стерильным скальпелем. С поверхности разреза берут материал пастеровской 

пипеткой или бактериологической петлей (рис. 1) и тонким слоем наносят на 
предметное стекло. 

 Из ткани органов делают мазки-отпечатки. С этой целью стерильными 

ножницами (скальпелем) вырезают небольшой кусочек, берут его пинцетом и легким прикосновением к чистому и обезжиренному предметному 
стеклу делают несколько отпечатков. 

- из гноя или мокроты: 
пастеровской пипеткой или бактериологической петлей (рис. 1) иссле
дуемый материал наносят на предметное стекло, накрывают другим предметным стеклом, раздавливают и разводят в разные стороны, получая при 
этом два мазка. 

- из крови:  
на предметное стекло, ближе к одному из краев, наносят каплю крови. 

Шлифованным предметным стеклом под углом в 45о делают скользящее 
движение, равномерно распределяя кровь тонким слоем по всей поверхности стекла. 

- из бактериальной культуры: 

для приготовления мазков из культуры, полученной на плотной питательной 
среде, на обезжиренное предметное стекло бактериологической петлей, предварительно прокаленной докрасна (профламбированной), наносят небольшую 
каплю стерильного физраствора. Затем петлю фламбируют повторно, внося ее 
в пламя горелки в вертикальном положении, после чего из пробирки с культурой вынимают пробку мизинцем правой руки, обжигают край пробирки и вносят в нее бактериологическую петлю. Прежде чем взять небольшое количество 
культуры, петлю охлаждают, касаясь изнутри стенок пробирки. Петлю с культурой осторожно вынимают, еще раз обжигают края пробирки и закрывают ее 
пробкой, а культуру вносят в приготовленную ранее каплю физраствора, тщательно размешивают, равномерно распределяя по стеклу в виде небольшого 
круга или овала (1,5-2 см в диаметре). После окончания приготовления мазка 
петлю вновь фламбируют над пламенем горелки. 
 

 

 
Для приготовления мазка из бульонной культуры бактериологической 

петлей наносят 1-2 капли исследуемого материала на поверхность предметного стекла и осторожно, круговыми движениями, равномерно распределяют ее тонким слоем в виде круга или овала. 

2-й этап. Приготовленные мазки высушивают на воздухе без нагре
вания. Для ускорения высушивания стекло с мазком, обращенным вверх, 

Рисунок 1 – Бактериологическая петля.

держат в струе теплого воздуха высоко над пламенем горелки, так, чтобы 
стекло не нагревалось. 

3-й этап. Мазки фиксируют.  

Методы фиксации мазков 

Физический способ. Для фиксации используют мазки, приготовлен
ные из бульонных или агаровых культур. С обратной стороны мазка карандашом по стеклу (стеклографом) или маркером обводят его границы и записывают шифр. Затем стекло с мазком, обращенным вверх, медленно проводят 3-4 раза в верхней части пламени горелки, нагревая стекло не выше 
60оС. После этого материал плотно прикрепляется к стеклу и не смывается 
при дальнейшей обработке. 

Химический способ используют для фиксации мазков из крови, маз
ков-отпечатков, и в некоторых случаях, мазков из патматериала, т.к. высокие температуры разрушают клеточные элементы. Для этих целей мазки 
погружают в фиксирующие жидкости: 

 - метиловый спирт - 5 минут; 
 - ацетон - 5 минут; 
 - этиловый спирт - 10 минут; 
 - жидкость Никифорова (смесь спирта и эфира в равных объемах) – 

15-20 минут. 

Цель фиксации: 
- закрепить микроорганизмы на стекле; 
- убить и тем самым обезвредить микробные клетки; 
- коагулировать белки микробных клеток, после чего они лучше восприни
мают окраску. 

4-й этап. Окрашивание мазков. При необходимости для окрашивания 

микроорганизмов используют различные методы, о которых мы будем говорить 
ниже. 

Устройство микроскопа (рис. 2) и правила работы  

Разрешающая способность человеческого глаза составляет 80 мкм и 

выше, а размеры микроорганизмов находятся в пределах 2-10 мкм, поэтому 
их обнаружение и изучение невозможно без микроскопа.  

Основные и наиболее важные части микроскопа – объективы и окуляры. 
Объективы подразделяются на сухие и иммерсионные. Слово 

«иммерсия» означает «погружение». Данные об увеличении каждого 
объектива обозначены на его оправе: х8, х40, х90, х100, два последние 
(х90 и х100) являются иммерсионными и имеют дополнительный буквенный индекс ОИ, или МИ. В микробиологии их применяют наиболее 
часто. Фронтальная передняя линза иммерсионных объективов очень 
мала, т.к. вследствие короткого фокусного расстояния имеет большую 
кривизну.