НЕЙРОГЛОБИН В ГИППОКАМПЕ КРЫС
Бесплатно
Основная коллекция
Издательство:
НИИ ноpмальной физиологии им. П.К. Анохина
Год издания: 2015
Кол-во страниц: 4
Дополнительно
Скопировать запись
Фрагмент текстового слоя документа размещен для индексирующих роботов
overstrain 130,5 (29,5; 231,5)). At the same time the darkness deprivation and physical activity had no effect on this indicator. It should be emphasized that such a debilitating effect of the two stressful factors in spring predictably, because in this season intact (control) and experimental rats had the highest level of corticosterone in the blood compared to other seasons. The results, on the one hand, indicate a higher sensitivity of rats to stressful influences in the spring, and on the other hand, show a high resistance of animals to stress in autumn, winter and summer. REFERENCES 1. Volchegorskiy I.A. Experimental modeling and laboratory evaluation of adaptive reactions of the organism // Volchegorskiy I.A., Dolgushin II, Kolesnikov O.L., Tseilikman V.E. Chelyabinsk State Medical Academy. - Chelyabinsk, 2000. - 167 p. 2. Gostyukhina AA // Proceedings of the Sixth All-Russian scientific-practical conference "Fundamental aspects of the compensatory-adaptive processes" - Novosibirsk, April 16-18, 2013 - P. 34-35. 3. Zamoshchina T.A. // Experimental and Clinical Pharmacology. 2000. V. 63. №2. P.12-15. DOI:10.12737/12326 НЕЙРОГЛОБИН В ГИППОКАМПЕ КРЫС И.П. Григорьев, О.В. Кирик, М.А. Сырцова ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины», Санкт-Петербург. ipg-iem@yandex.ru Иммуногистохимически исследована топография распределения нейроглобина (НГ) в гиппокампе крысы. НГ выявлен в цитоплазме и в малом количестве – в ядре нейронов зон СА1-СА3 и в зубчатой извилине, но не в субгранулярной зоне. Ключевые слова: нейроглобин, гиппокамп, крыса, иммуногистохимия. Нейроглобин (НГ) – это гем-содержащий белок, способный обратимо связывать кислород, в наибольшем количестве представленный в нервной ткани. Что касается функции НГ, то имеются доказательства его антиапоптотического действия: он способен ингибировать митохондриальный путь апоптоза нервных клеток [2]. Распределение НГ в головном мозге позвоночных исследовалось, однако данные относительно его локализации в гиппокампе противоречивы [4]. Исходя из важной функциональной роли НГ и гиппокампа и противоречивости данных о локализации НГ в этой структуре мозга, в настоящем исследовании была поставлена цель определить наличие экспрессии НГ в гиппокампе крысы и описать топографию его распределения. Методика исследования. В работе использован головной мозг половозрелых крыс-самцов линии Вистар (n=8). Животных умерщвляли с соблюдением международных правил Хельсинкской декларации о гуманном обращении с животными. Материал был фиксирован в цинк-этанол-формальдегиде – фиксаторе, который позволяет
хорошо сохранять структуру нервной клетки и иммуногенные эпитопы крупных белков [1]. Для выявления НГ применяли моноклональные мышиные антитела (клон 13С8, Abcam, Великобритания). После постановки реакции часть срезов подкрашивали гематоксилином. Результаты исследования. НГ-иммунопозитивная окраска выявлялась в клетках зон СА1-СА3 и в зубчатой извилине гиппокампальной формации, причём окрашивание было умеренно интенсивным в сравнении с неокрашенным белым веществом. Интенсивность окрашивания нейронов была примерно одинаковой в зонах СА1-СА3 и в зубчатой извилине, однако в субгранулярной зоне НГиммунореактивные нейроны не наблюдались, а в области хилуса число их было незначительным. Несколько более сильной окраской на НГ выделялись отдельные крупные нейроны, расположенные выше или ниже слоя пирамидных клеток. В нервных клетках всех областей гиппокампа иммунореактивная окраска на НГ наблюдалась преимущественно в цитоплазме нейронов и в начальном сегменте апикального дендрита – в виде интенсивно окрашенных глыбок. Ядро было иммунонегативным, однако в нём встречались отдельные мелкие, но отчётливо видимые иммунопозитивные гранулы. Представленные результаты однозначно свидетельствуют о наличии НГ в нейронах гиппокампа. НГ выявлялся во всех зонах Аммонова рога и в зубчатой извилине, причём нейроглобиновая иммунореактивность была примерно одинаковой интенсивности во всех нервных клетках за исключением непирамидных нейронов областей СА1-СА3, в которых реакция была сильнее. В то же время обращает на себя внимание отсутствие НГиммунопозитивной окраски в субгранулярном слое – зоне постоянного нейрогенеза [3]. В нейронах НГ концентрировался в цитоплазме, что согласуется с его предполагаемой ролью антиапоптотического фактора, ингибирующего митохондриальный путь апоптоза нервных клеток. В то же время небольшое количество НГ выявляется в клеточном ядре, что указывает на какую-то неизвестную пока его функцию во внутриядерных процессах. Работа поддержана грантом РНФ 14-15-00014. Литература. 1. Коржевский Д.Э., Сухорукова Е.Г., Гилерович Е.Г. и др. // Морфология. 2013. Т. 143, № 2. С. 81-85. 2. Brittain T. // Cells. 2012. Vol. 1, No. 4. P. 1133-1355. 3. Christian K.M., Song H., Ming G.L. // Annu. Rev. Neurosci. 2014. Vol. 37. P. 243-262. 4. Hankeln T., Wystub S., Laufs T. // IUBMB Life. 2004. Vol. 56 No. 11-12. P. 671-679. NEUROGLOBIN IN THE RAT HIPPOCAMPUS I.P. Grigorev, O.V. Kirik, M.A. Syrtsova Institute of Experimental Medicine, St. Petersburg, Russia ipg-iem@yandex.ru
Topography of neuroglobin (Ng) distribution in the rat hippocampus was studied immunohistochemically. Ng was revealed in the cytoplasm and in small amounts in the nucleus of neurons in the CA1-CA3 subfields and the dentate gyrus, but not subgranular zone. Key words: neuroglobin, hippocampus, rat, immunohistochemistry. Neuroglobin (Ng) is a heme-containing protein capable to bind reversibly the oxygen and most abundant in the nervous tissue. As to the function of Ng, there is evidence of its anti-apoptotic effects as it is able to inhibit the mitochondrial pathway of apoptosis of the nerve cells [2]. Ng distribution in vertebrate brain has been studied, but the data on the Ng localization in the hippocampus are controversial [4]. Taking into consideration the important functional roles of Ng and the hippocampus and controversy of data on the Ng localization in this brain area, the aim of the present study was to determine the expression of Ng in the rat hippocampus and to describe the topography of Ng distribution. Methods Brains of adult male Wistar rats (n=8) were used in the study. The animals were killed in accordance with the Code of Ethics of the World Medical Association (Declaration of Helsinki). The material was fixed in the zinc-ethanol-formaldehyde fixative, which preserve well the structure of nervous cells and the immunogenic epitopes of large proteins [1]. Ng was revealed with the monoclonal mouse antibody (clone 13C8, Abcam, UK). After the end of immunohistochemical reaction, a part of sections was counterstained with hematoxylin. Results Ng-immunopositive staining was revealed in the hippocampal formation cells of the CA1-CA3 subfields and in the dentate gyrus. The staining was moderately intensive in comparison with the unstained white matter. Staining intensity of the neurons was approximately similar in the CA1-CA3 subfields and in the dentate gyrus, but no Ngimmunoreactive neurons were found in the subgranular zone, while only few Ng-immunopositive neurons were seen in the hilus. Somewhat denser Ng staining was characteristic for some large neurons located outside (higher and lower) the stratum pyramidale. In nerve cells of all hippocampal areas, the Ng immunoreactive staining was observed mainly in the cytoplasm and the initial segment of apical dendrite as intensively stained aggregates. The nucleus was immunonegative, but some small and distinctly visible immunopositive granules were evident. The presented results clearly indicate the localization of Ng in neurons of the hippocampal formation. Ng was revealed in all zones of the Ammon’s horn and the dentate gyrus with approximately similar intensity of Ng immunostaining in all nerve cells with exception of the non-pyramidal neurons of the CA1-CA3 subfields, in which the reaction was denser. Surprisingly, no Ng-immunopositive staining was found in the subgranular zone, the area of constant neurogenesis [3]. In neurons, Ng was concentrated in cytoplasm which is consistent with its assumed role of an anti-apoptotic agent inhibiting the mitochondrial pathway of apoptosis of the nerve cells. It should be noted that small
amounts of Ng is found in the cellular nucleus, which points to an unknown yet function of Ng in the nuclear processes. Acknowledgement. The study is supported by the Russian Science Fund (grant RNF 14-15-00014). Bibliography. 1. Korzhevskii D. E., Sukhorukova E. G., Gilerovich E. G., et al. // Neurosci. Behav. Physiol. 2014. Vol. 44, No. 5. P. 542-545. 2. Brittain T. // Cells. 2012. Vol. 1, No. 4. P. 1133-1355. 3. Christian K.M., Song H., Ming G.L. // Annu. Rev. Neurosci. 2014. Vol. 37. P. 243-262. 4. Hankeln T., Wystub S., Laufs T., et al. // IUBMB Life. 2004. Vol. 56 No. 11-12. P. 671-679. DOI:10.12737/12327 ОСОБЕННОСТИ СЕКРЕЦИИ МЕДИАТОРА В ДВИГАТЕЛЬНОМ НЕРВНОМ ОКОНЧАНИИ ХОЛОДНОКРОВНЫХ ПРИ ДЕНЕРВАЦИИ П.Н. Григорьев, А.Л. Зефиров Кафедра нормальной физиологии (зав. — чл.-кор. РАН, проф. А.Л. Зефиров) Казанского государственного медицинского университета, Казань grigorievp@yahoo.com Ключевые слова: двигательное нервное окончание, активная зона, микроэлектродное отведение, секреция медиатора, денервация. Основной функцией пресинаптических нервных окончаний является секреция медиатора, осуществляемая посредством экзоцитоза синаптических везикул в области специализированных образований активных зон. Большой научный интерес представляют регуляторные механизмы секреции медиатора и роль цитоскелета [4]. В качестве одного из экспериментальных подходов, приводящего к нарушению функции цитоскелета, используется метод денервации [2]. В данной работе проведено исследование особенностей секреции медиатора в двигательном нервном окончании лягушки при денервации. Методика исследования. Эксперименты проводили на нервно-мышечных препаратах кожно грудинной мышцы лягушек Rana Ridibunda в осенне-зимний период. Анатомическую денервацию осуществляли под эфирным наркозом на расстоянии 1-1.5 см от входа нерва в кожно-грудинную мышцу. После денервации лягушек содержали при комнатной температуре 4-5 суток. Использовался раствор Рингера для холоднокровных следующего состава (в ммоль/л): NaCl - 115; KCl - 2.0; CaCl2 - 0.15-0.8; MgCl2 –2,0; NaHCO3 2.4-2.7; pH - 7.2; температура - 20 оС. Для регистрации токов концевой пластинки (ТКП) были использованы одно- и трехмикроэлектродные методы внеклеточного отведения [1,5]. Временной ход секреции медиатора определялся методом оценки распределения синаптических задержек. Методики расчета длительности синаптических задержек, квантового состава ТКП и анализа топографии секреции медиатора детально описаны в предыдущих работах [1,5].