Копрологические исследования толстого кишечника на фоне бластоцистной инвазии

Москва 

Издательство «ФЛИНТА» 

2019 

Н.В. Бугеро, 
Н.И. Потатуркина-Нестерова, 
Н.А. Ильина 

КОПРОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ТОЛСТОГО КИШЕЧНИКА
НА ФОНЕ БЛАСТОЦИСТНОЙ ИНВАЗИИ

Монография 

3-е издание, стереотипное

УДК 616:579.61 
ББК  52.64 
          Б90 

Р е ц е н з е н т 

зав. курсом микробиологии кафедры общей и клинической фармакологии  
ФГБОУ ВПО «Ульяновский государственный педагогический университет 

им. И.Н. Ульянова», проф. Ю.Ю. Красноперова 

Бугеро Н.Н. 

Б90     Копрологические исследования толстого кишечника на фоне бластоцистной 
инвазии [Электронный ресурс] 
: 
монография 
/ 
Н.В. 
Бугеро, 
Н.И. 
Потатуркина-Нестерова, Н.А. Ильина. – 3-е изд., стер. – М. : ФЛИНТА, 2019. – 
80 с.  

ISBN 978-5-9765-1595-6 

В книге представлены материалы, отражающие современные представления о

роли простейших Blastocystis spp. в патологии желудочно-кишечного тракта человека. Монография содержит сведения о функциональном состоянии толстого кишечника при инвазии бластоцистами. Впервые приведены результаты изучения толстой
кишки по данным копрологических исследований. Особое внимание уделено вопросам направленности химических процессов в кишечнике при бластоцистной инвазии. Достоинством монографии является экспериментальное подтверждение роли
Blastocystis spp. в нарушении функционального состояния толстого кишечника человека по данным копрологических исследований и произведена его оценка для диагностики паразитарных инфекций. Монография является обобщением новейших материалов литературы и результатов собственных исследований. 

Для специалистов в области микробиологии, паразитологии, гастроэнтероло
гии, эпидемиологии. 

УДК 616:579.61 
ББК  52.64 

ISBN 978-5-9765-1595-6
 Издательство «ФЛИНТА», 2014

ОГЛАВЛЕНИЕ 
 
ВВЕДЕНИЕ ................................................................................................ 4 

ГЛАВА 1. РОЛЬ ПРОСТЕЙШИХ BLASTOCYSTIS spp.В 
ПАТОЛОГИИ ЧЕЛОВЕКА .................................................... 

 

6 

ГЛАВА 2. СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О 
МИКРОБИОЦЕНОЗЕ КИШЕЧНИКА ЧЕЛОВЕКА ............ 

 

15 

ГЛАВА 3. КОПРОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ТОЛСТОЙ 
КИШКИ .................................................................................... 

 

25 

ГЛАВА 4.  РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ...................................... 36 

4.1. Выявление простейших бластоцист .................................. 36 

4.2. Морфологическое исследование кала при 
бластоцистозе ...................................................................... 

 

39 

4.3. Физико-химическое исследование кала лиц инвазированных Blastocystis spp. ...................................................... 

 

45 

4.4. Направленность химических процессов в толстом  
кишечнике при бластоцистной инвазии ........................... 

 

58 

РЕКОМЕНДУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА ...................................................... 61 

 
 
 
 
 
 
 
 
 

ВВЕДЕНИЕ 
 
В последние годы появились данные о важной роли в формировании 
патобиоценозов кишечника, помимо бактерий и грибов, таких простейших как 
Blastocystis spp. (Guignard et al., 2000; Taamasri et al., 2002; Abe, Wu, Yoshikawa, 
2003; 
Abe, 
2003). 
Литературные 
данные 
и 
результаты 
собственных 
исследований показывают высокую частоту встречаемости простейших бластоцист как среди людей, так и среди животных (Larrosa-Haro, Ruiz-Perez, 2002; 
Wang, Li, Wang, 2002). При этом бластоцистоз привлекает внимание 
исследователей сравнительно недавно. На протяжении последних лет ведется 
изучение биологии паразита и патогенез этого заболевания. 
Известно, что инвазия бластоцистами сопровождается структурной 
перестройкой в микробиоценозе кишечника, проявляющейся снижением 
частоты и плотности колонизации бифидо- и лактобактерий и увеличением 
обсемененности условно-патогенными энтеробактериями, стафилококками и 
грибами (Ильина, 2006; Красноперова, 2009; Нестеров, 2009). Однако, 
представление о функциональном состоянии кишечника людей было бы не 
полным без оценки направленности химических процессов кишечника. 
Согласно современным представлениям, патологический процесс в 
кишечнике отрицательно влияет на течение физиологических процессов, 
вызывая нарушение обычного химизма, которое не может не оставаться 
безразличным для организма (Волк, 2006).  
В состав испражнений входит много химических веществ, содержание 
которых зависит от направленности процессов пищеварения, бактериальной 
флоры кишечника, характера принимаемой пищи (Каторкин, 1969). В 
нормальных 
условиях 
содержание 
отдельных 
химических 
веществ 
в 
испражнениях колеблется в определенных пределах. Нарушение деятельности 
кишечника приводит к изменению кишечного химизма, что сказывается на 
количестве химических ингредиентов в кале и позволяет при исследовании 
получить ценные сведения о состоянии кишечника (Алексеев-Беркман, 1954). 
Появляющиеся в избыточном количестве химические соединения 
обладают раздражающим действием, что усиливает воспалительную реакцию 
слизистой оболочки. Последняя реагирует гиперсекрецией слизи и серозной 
жидкости, 
содержащей 
большое 
количество 
белков, 
которые 
могут 
нейтрализовывать или механически отграничивать содержимое от стенок, что 
является компенсаторно-приспособительной реакцией и надежным маркером 
воспалительного процесса.  
Только всестороннее изучение картины кишечных экскрементов как целого дает представление о тех или иных формах нарушений пищеварения. Для 
этой цели в России разработана и с 1932 г. постоянно применяется единая методика и техника исследования каловых мacc по специально составленной схеме, названной копрограммой.  
Копрограмма представляет собой итог таких качественных и количественных исследований, которые с наибольшей полнотой отражают картину кала. 

Копрограмма определяет действительные соотношения всех элементов кала, 
обнаруживаемых при макро-, микроскопическом, химическом, паразитологическом и бактериоскопическом изучении, произведенном непосредственно после 
дефекации.  
Однако, до сих пор остается не изученным химизм кишечника при 
инвазии простейшими Blastocystis spp.  
В монографии представлены результаты исследования направленности 
химических процессов в кишечнике человека при бластоцистной инвазии по 
данным копрологических исследований и произведена его оценка для диагностики паразитарных инфекций. 

ГЛАВА 1.  
РОЛЬ ПРОСТЕЙШИХ BLASTOCYSTIS spp.  
В ПАТОЛОГИИ ЧЕЛОВЕКА 
 
Blastocystis spp. является одним из наиболее часто встречающихся одноклеточных эукариотических организмов кишечного тракта человека и различных животных (Biavasco, 2007; Markell et al, 1995).  
В начале XX в. Alexeieff впервые описывает и зарисовывает, в соответствии с требованиями номенклатуры этого кишечного паразита. Он относит бластоцист к несовершенным грибам класса Adelomicetos под названием Blastocystis enterocola (Stenzel et al, 1991). Brumpt в 1912 г., работая с фекальным материалом человека, присваивает данным микроорганизмам специфическое название Blastocystis hominis (Mac Kinnon et al, 1997).  
Несмотря на применение молекулярно-филогенетических подходов, к 
изучению этого микроорганизма (Borehman et al, 1993; Berti et al, 1998; Biavasco 
et al, 2007) противоречивые описания природы этого паразита продолжалось на 
протяжении XX в. (Корнюшенкова, 1998; Stenzel et al, 1989; Suresh, 1995, 2002). 
Согласно последней современной классификации микроорганизмов Blastocystis hominis – это простейшее, которое относится к царству Chromista, подцарству Chromobiota, типу Stramenopiles или Heterokonta, подтипу Opalinata, 
класс Blastocystea, семейство Blastocystidae, род Blastocystis, вид Blastocystis 
hominis (Ho et al., 2000; Arisue et al., 2002; Tan et al., 2002; Noël et al., 2003). 
Рост интереса ученых и практических паразитологов к этому простейшему объясняется его чрезвычайно широким распространением в мире. Он обнаруживается у 30–50% жителей, развивающих стран и у 1,5–10% развитых (Abe, 
2004; Kevin, 2008; Vogelberg, 2010; Yoshikawa, 2009, 2010; Meloni, 2011). Так, 
например, по данным Horiki и соавторов (2007) при обследовании практически 
здорового населения Токио (Япония) бластоцисты обнаруживались в 7,4% случаев, а при аналогичных исследованиях в Перми, проведенных Н.М. Коза и соавторами в 2005–2009 гг., бластоцистная инвазия выявлена в 13,1% случаев. В 
Омске по результатам однократных обследований населения в 2009–2010 гг. 
частота обнаружения Blastocystis hominis у здоровых составляла от 0,9 до 2,3% 
(Старостина, 2002). 
На основании анализа литературных данных B.hominis представляет собой полиморфный эукариотический микроорганизм (Boreham, Stenzel, 1993; 
Quilez et al., 1993; Stenzel, Boreham, 1996; Yoshikawa et al., 1998). Знание морфологии B.hominis имеет существенное значение для установления диагноза, 
вызываемого им паразитоза (Galantowicz et al, 1993; Myjak M., 1997; Villar D.J. 
et al., 1998).  
К настоящему моменту в научной литературе описаны четыре основные 
морфологические формы: вакуолярная, гранулярная, амебоидная и цисты (Tan, 
Singh, 1996; Tan, Ibrahim, 2001), а также в последнее время исследователями 
часто описывается авакуолярная и мультивакуолярная формы бластоцист 
(Windsord et al., 2002). 

Доминирующим морфологическим типом клетки как в препаратах, приготовленных из культуры, так и из исследуемого материала, является вакуолярный. Размеры бластоцист данной формы колеблются в широких пределах от 2 
до 200 мкм, в среднем – от 4 до 15 мкм (Reinthaler et al., 1987, 1988; Stenzel, 
Boreham; 1996).  
По периферии бластоцист тонким слоем располагается цитоплазма и находящиеся в ней органеллы. Встречаются особи с вакуолизированной цитоплазмой, в которой различаются ядра в количестве от 1 до 15. Ядра бластоцист 
плотные или фрагментированные (Dunn et al., 1989; Mac Pherson, Mac Queen; 
1994, Horiki, 1999). Кроме того клетки бластоцист содержат аппарат Гольджи, 
митохондрии, окруженные шероховатой эндоплазматической сетью и рибосомы (Ricci, 1984; Doyle et al., 1990; Suresh et al., 1995; Pakandl, 1999; Nasirudeen et 
al., 2001; Таn et al., 2001). 
Гранулярная форма встречается в препаратах из кала реже, чем в препаратах из культуры. Вероятно, они происходят от вакуолярной формы (Stenzel, 
Boreham, 1996). Гранулярные клетки бластоцист сходны по строению с вакуолярными, но характеризуются присутствием в периферической цитоплазме, а 
иногда и внутри ЦТ, многочисленных гранул. Гранулы могут представлять собой миелиновые включения, пузыри, кристаллы или капли жира (Dunn et в., 
1989; Zierdt, 1991; Suresh et al., 1995).  
В 2000 г Vdovenko пересмотрел разделение клеточных форм на вакуолярные и гранулярные и предположил, что эти формы представляют собой последовательные стадии внутриклеточной дистрофии.  
Амебоидная форма обнаруживается преимущественно в старых культурах, 
и, редко в фекалиях, при остром диарейном синдроме. Доминируют бластоцисты 
размером 10 мкм, имеющие овальную форму с одной или двумя псевдоподиями. 
Клетки имеют также 1–2 ядра, иногда с крупной кариосомой, прилегающей к 
ядерной оболочке (Pakand, 1999; Таn et al., 1996). Электронная микроскопия показала наличие в амебоидных клетках центрального тела, аппарата Гольджи и 
большого количества митохондрий. Предлагают, что амебоидная форма является 
промежуточной между вакуолярной и цистной стадиями (Singh et al., 1995; Таn 
et al., 2001).  
Наличие у B.hominis цист подтвердили относительно недавно (Moe et al., 
1997, 1999; Zaman et al., 1998, 1999). Трудность в выявлении цист заключается 
в относительно небольших размерах данного типа клеток – от 3 до 5 мкм. 
Форма цист обычно сферическая или овальная. В аксенических культурах 
встречаются редко. Растровая электронная микроскопия цист B.hominis показывает, что некоторые из них имеют внешнюю осмофильную оболочку, в то 
время как у других форм она отсутствует (Stenzel, Boreham, 1991; Zaman, 
Howe, Hg, 1995).  
Также были описаны мультивакуолярные формы бластоцист (Stenzel et 
al., 1991; Stenzel, Boreham, 1996). Клетки, окруженные внешней толстой оболочкой, содержащие множество вакуолей различного диаметра. Размер клеток 
колеблется между 5 и 8 мкм. Lanuza et al. (1991, 1994, 1997, 1999) предлагают, 
что авакуолярные и мультивакуолярные формы представляют собой стадии 

жизненного цикла паразита внутри макроорганизма, в то время как вакуолярные и гранулярные бластоцисты доминируют в культурах.  
Возбудитель бластоцистоза имеет своеобразное строение – настоящая 
клеточная стенка у него отсутствует, но имеется мембрана, с которой тесно связаны цитоплазма и крупное центральное тельце (вакуоль), занимающее до 75% 
объема клетки (Stenzel, Boreham, 1991, 1996; Lanusa, 1997). Внешняя поверхность мембраны представляет собой фибриллярный слой неодинаковой толщины и плотности (Mai Nguyen, 1989; Boreham et al., 1996).  
Цитоплазма имеет вид тонкого кольца по периферии клетки, которое несколько утолщается и принимает форму полумесяца вблизи ядер (Zierdt et al., 
1976; Matsumoto et al., 1987). У B.hominis электронной микроскопией выявлены 
рибосомы, аппарат Гольджи, цитоплазматические микротрубочки, ядра и митохондрии, сходные по морфологии с таковыми у простейших организмов, а также псевдоподии (Uperoft , 1989; Stenzel, Dunn, 1989; Stenzel, Boreham, 1991, 
1996; Cassidy et al., 1994).  
Различными авторами в результате использования методов SDS – PAGE, 
иммуноблоттинга, ИФА, электрофоретического кариотипирования, RFLP и 
RAPD были описаны многочисленные морфологически сходные изоляты 
B.hominis людей и некоторых животных (Gericke et al., 1997; Yoshikawa et al., 
1998; Init et al., 1999; Hoevers et al., 2000; Kaneda et al., 2001, 2007). Они показали значительную разнородность, как генетическую, так и антигенную, между 
изолированными бластоцистами. Данные различия настолько существенны, что 
авторы предлагают выделение различных видов. 
Установлено что, генотип B.hominis состоит из 8 хромосом: 2200, 1280, 
890, 840, 700, 650, 540 и 260 квр, saccord индекс составляет 0,5714–1,0. В результате исследований были выявлены 3 варианта кариотипа: А–8, В–6 и С–1 
(Ng, 1996, 1999; Carbajal, et al., 1997). Однако изучение генома бластоцист все 
еще находится на начальной стадии. 
Антигены бластоцист были изучены при помощи SDS – PAGE 
(Kukoschke, Müller, 1991), иммуноблоттинга (Boreham et al., 1993; Lanuza et al., 
1999), иммунодиффузии (Müller, 1994; Lanuza et al., 1999), и иммуно- 
флюоресцентного анализа (Таn et al., 2001).  
Lanuza et al. (1999) отметили различия в антигенной структуре штаммов 
выделенных от больных с хронической и острой формами диареи. Данная информация позволяет предположить, что различия между серологическими 
группами бластоцист могут быть связаны с особенностями развития и течения 
вызываемого ими заболевания. 
Имеются данные о внутривидовом разнообразии B.hominis (Husebye, 
1994; Boreham, 1996; Macfarlane, 1997; Bengmark, 2000). Были обнаружены варианты этих простейших, отличающихся по структуре ДНК.  
Немецкий исследователь, доктор Kukoschke в 2002 г., был одним из первых которому удалось выявить в фекалиях больных диареей и здоровых лиц 
присутсвие различных типов Blastocystis spp.