Вестник Роcсийской академии медицинских наук, 2013, № 12

I.A. Razumov1,3, V.A. Svyatchenko1, E.V. Protopopova1, G.V. Kochneva1, N.N. Kiselev1, N.V. Gubanova3, 
A.G. Shilov3, V.A. Mordvinov3, S.V. Netesov2, P.M. Chumakov2,4, V.B. Loktev1,3

1 State Research Center of Virology and Biotechnology «Vector», Koltsovo, Novosibirsk Region; Russian Federation
2 Novosibirsk State University, Russian Federation
3 Institute of Cytology and Genetics, SB RAS, Novosibirsk, Russian Federation
4 Engelhardt Institute of Molecular Biology, RAS, Moscow, Russian Federation

Oncolytic Properties of Some Orthopoxviruses, Adenoviruses 
and Parvoviruses in Human Glioma Cells

Currently one of the most promising approaches in development of cancer virotherapy is based on the ability of oncolytic viruses to selective infection 
and lysis of tumor cells. Aim.The goal of the study was to identify and evaluate perspective oncolytic viruses capable of selectively destroying human 
glioma cells. Patients and methods. Original GB2m, GA14m and GB22m glioma cell cultures derived from patients were used for evaluating in vitro 
oncolytic activity of some typical orthopoxviruses, adenoviruses and parvoviruses. Results. The oncolytic activity in the human glioma cell models 
was confirmed for LIVP and WR strains of vaccinia virus,  Adel2 and Ad2del strains with deletions within E1B/55K gene and derived from human 
adenoviruses type 2 and 5, respectively. Conclusions. We consider these oncolytic viruses as promising agents for the treatment of human malignant 
glioma.
Key words: glioma cell, glioblastomas cell,  oncolytic viruses.
(Vestnik Rossiiskoi Akademii Meditsinskikh Nauk — Annals of the Russian Academy of Medical Sciences. 2013; 12: 4–8)

АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ОНКОЛОГИИ

И.А. Разумов 1,3, В.А. Святченко1, Е.В. Протопопова1, Г.В. Кочнева1, Н.Н. Киселёв1, Н.В. Губанова3, 
А.Г. Шилов3, В.А. Мордвинов3, С.В. Нетёсов2, П.М. Чумаков2,4, В.Б. Локтев1,3 

1 Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор», р.п. Кольцово, Новосибирская область, 
Российская Федерация
2 Новосибирский государственный университет,  Российская Федерация
3 Институт цитологии и генетики СО РАН, Новосибирск, Российская Федерация
4 Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН, Москва, Российская Федерация

Оценка онколитической активности ряда 
ортопоксвирусов, аденовирусов и парвовирусов 
в отношении клеток глиом человека

В настоящее время одним из перспективных подходов к разработке средств лечения опухолей человека является виротерапия, базирующаяся 
на способности онколитических вирусов селективно инфицировать и убивать опухолевые клетки. Целью настоящей работы стали поиск 
и оценка перспективных онколитических вирусов, оказывающих избирательный литический эффект на клетки глиом человека. Пациенты 
и методы. Оригинальные клеточные культуры глиом GB2m, GА14m и GB22m, полученные от пациентов, были использованы для выявления 
онколитической активности некоторых типичных представителей ортопоксвирусов, аденовирусов и парвовирусов в экспериментах in vitro. 
Результаты. Обнаружена  онколитическая активность in vitro штаммов ЛИВП и WR вируса осповакцины, а также аденовирусов Adel2 
и Ad2del, представляющих собой делеционные варианты по гену Е1В55К аденовирусов человека 2-го и 5-го серотипов, соответственно, 
в отношении клеток злокачественных глиом человека. Выводы. Эти онколитические вирусы, по-видимому, могут быть использованы 
для создания перспективных препаратов для лечения глиом человека.
Ключевые слова: глиальные опухоли, глиобластомы, онколитические вирусы. 
(Вестник РАМН. 2013; 12: 4–8)

Введение

Онкологические заболевания представляют важнейшую проблему для общественного здравоохранения, так 
как приносят тяжелые страдания пациентам и являются одной из основных причин смертности населения 
в мире. Их лечение, далеко не всегда результативное, 

требует больших финансовых затрат [1]. Лидирующее 
место в структуре нейроонкологической заболеваемости занимают глиомы головного мозга, заболеваемость 
которыми не имеет тенденций к снижению и продолжает расти [2, 3]. Совершенствование высокотехнологичных методов, направленных на улучшение эффективности хирургического и химиолучевого лечения, 

АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ОНКОЛОГИИ

не приносит кардинальных успехов. Результаты лечения глиом, особенно глиобластом, составляющих более 50% глиом, остаются неудовлетворительными. Так, 
за последние 30 лет средняя продолжительность жизни пациентов с глиобластомой возросла всего лишь 
на 2 месяца [2]. 
В последние годы началась разработка подходов к таргетной или целевой терапии глиом, основанной на нацеленном воздействии на злокачественные клетки-мишени, 
в частности с использованием онколитических вирусов 
[4, 5]. Первое сообщение о чувствительности опухолей 
глиального происхождения к вирусам было опубликовано в 1961 году [6]. Несколько позднее была показана 
онколитическая активность поксвирусов, парвовирусов 
и аденовирусов в отношении клеток глиом in vitro [7]. Онколитические вирусы в опытах на лабораторных животных с привитыми глиомными опухолями показали свою 
высокую эффективность и избирательность в отношении 
глиомных ксенотрасплантатов [5], а в ряде случаев достигалось полное разрушение опухолей и выздоровление 
животных.
В настоящее время ряд первых препаратов на основе 
онколитических вирусов находится на стадии доклинических или клинических испытаний [5, 8]. Они продемонстрировали свою безопасность, что особенно важно для 
вирусных онколитических препаратов, непосредственно 
вводящихся в мозг пациента. Повышение эффективности 
онколитических вирусов, конструирование и создание 
генно-инженерными методами нового поколения онколитических рекомбинантных вирусов, а также разработка 
на их основе противоопухолевых препаратов, обладающих высокой степенью избирательной онколитической 
активности в отношении глиом человека, представляется 
крайне важной и актуальной задачей.
Для более полной оценки онколитической активности 
вирусных препаратов помимо широко используемых глиомных клеточных линий, по всей вероятности, необходимо использовать короткоживущие или малопассажные 
культуры клеток, полученные непосредственно из опухолей человека и культивируемые ограниченное количество 
(1—20) пассажей [9]. Неоценимым преимуществом таких 
культур клеток является их наибольшее соответствие 
исходным клеткам опухоли пациента, что делает такие 
культуры перспективной моделью для оценки токсичности, избирательности, онколитической активности препаратов и адекватности противоопухолевой терапии как 
in vitro, так и in vivo.
Цель исследования: осуществить поиск перспективных 
штаммов вирусов, вызывающих селективный онколитический эффект на различные типы клеточных культур, 
происходящих из глиомных опухолей человека. Короткоживущие культуры глиомных клеток, полученные нами 
из опухолей головного мозга человека, были использованы в качестве новой модели для оценки онколитического 
воздействия различных вирусов на клетки опухоли in vitro.

Материалы и методы

Культуры клеток. В работе использовали следующие 
опухолевые культуры клеток человека: А431 (эпидермальная карцинома), U-87MG (глиобластома из коллекции ATCC), а также малопассажные культуры клеток – 
глиобластомы GB2m (23 пассажа) и GB22m (10 пассажей) 
и астроцитома GА14m (11 пассажей), полученные нами 
ранее из опухолей головного мозга больных и позитивные по маркеру глиальных клеток – GFAP (глиальный 

фибриллярный кислый белок). В качестве первичных или 
первично-перевиваемых культур клеток человека применяли диплоидные культуры клеток, ФЭЧ-15 (клетки 
кожно-мышечной ткани эмбриона человека), MRC-5 
(клетки легких эмбриона человека), а также MCF-10А – 
нормальные или нетуморогенные эпителиальные клетки 
молочной железы человека. В работе также использовали 
культуры НЕК293 (клетки почки эмбриона человека, 
трансформированные генами Е1А и Е1В аденовируса 
человека 5-го серотипа), MDCK (перевиваемая культура 
клеток почек собаки) и CV-1 (перевиваемая культура клеток почки африканской зеленой мартышки).
Вирусы. В работе использовали штаммы ЛИВП 
и WR вируса осповакцины, которые культивировали, очищали методом дифференциального центрифугирования 
и определяли инфекционную активность, как описано 
ранее [10]. Аденовирусы человека 5-го и 2-го серотипов 
(Ad5 и Ad2) были получены из Государственной коллекции вирусных штаммов при Институте вирусологии им. 
Д.И. Ивановского РАМН (г. Москва). Рекомбинантные 
аденовирусы Adel2 и Ad2del, дефектные по гену Е1В, 
были сконструированы, и их культивирование в культуре 
клеток HEK293, очистку и титрование инфекционной 
активности осуществляли, как описано ранее [11]. Парвовирус собак (CPV), штамм «Лайка-1993», выделенный 
в ГНЦ ВБ «Вектор», культивировали на клетках MDCK 
в соответствии с рекомендациями [12]. Титр вируса определяли в реакции гемагглютинации с использованием 
эритроцитов макак-резус, как описано ранее [13]. 
Культивирование и ростовая среда. Монослойное культивирование линий клеток и полученных культур клеток из опухолей головного мозга больных проводили 
с использованием среды ДМЕМ/F12, содержащей 10% 
фетальной сыворотки и 80 мкг/мл сульфата гентамицина. Для культуры клеток MCF-10А использовали среду 
MEGM (Clonetics) с набором факторов роста MEGM 
SingleQuots (Clonetics).
Определение цитолитической активности аденовирусов in vitro. Исследование цитолитической активности 
вирусов на панели нормальных и опухолевых клеток 
проводили микрометодом, согласно Chanas и соавт. [14]. 
Регистрацию индуцированного вирусами цитопатического эффекта проводили с помощью 3-[4,5-диметилтиазол2-ил]-2,5-дифенилтетразолиум бромида (МТТ) или 
МТТ-теста [15]. Оптическую плотность измеряли на 
спектрофотометре Multiscan при длине волны 492 нМ. 
Литическую активность вирусов для соответствующих типов клеток выражали через lgТЦПД 50/мл (lg разведения 
50% тканевой цитопатогенной дозы вирусной суспензии, 
вызывающей 50% лизис клеток).
Определение цитолитической активности вирусов осповакцины в культурах клеток (ХТТ-тест). Исследование цитолитической активности штаммов вируса осповакцины 
на культурах первичных, диплоидных и опухолевых клеток проводили микрометодом на 96-луночных культуральных планшетах (Costar) с использованием реагента 
2,3-бис-(2-метокси-4-нитро-5-сульфофенил)-2Hтетразолий-5-карбоксанилид (ХТТ) [16]. Онколитическую активность выражали как 50% цитотоксическую 
дозу (ЦТД50), т.е. такую концентрацию вируса, которая 
вызывала гибель 50% клеток. Для этого определяли среднее значение и дисперсию для различных концентраций 
вируса, строили график зависимости ОП от множественности инфекции. По графику определяли ЦТД50, при 
которой величина ОП490/620, измеренная в зараженных 
лунках, составляет 50% от величины ОП490/620, вычисленной в лунках с незараженной культурой.

ВЕСТНИК РАМН /2013/ № 12

Результаты

Для определения инфекционной активности исследуемых вирусов мы использовали различные методы 
и подходы, что позволяло определять как вызываемый вирусами цитопатический эффект, так и накопление вируса в результате его репликации в культуре 
опухолевых клеток при отсутствии цитопатических 
проявлений инфекции. Эффективность накопления 
парвовируса собак в культурах клеток оценивали исходя из титра вируса, который определяли в реакции 
гемагглютинации (РГА) с использованием эритроцитов 
макак-резусов (табл. 1). Как видно из представленных 
данных, при размножении парвовируса собак (штамм 
«Лайка») в клетках глиом человека его накапливалось 
в 80–160 раз меньше, чем в культуре клеток MDCK. 
В то же время парвовирус собак реплицировался в клетках глиом человека с достоверно более выраженной 
эффективностью по сравнению с используемыми культурами диплоидных клеток человека ФЭЧ-15 и MRC-5 
(в 16 и 8 раз, соответственно). Однако размножение 
парвовируса собак в клетках глиомы человека, к сожалению, не вызывало цитолитического эффекта, который наблюдался в клетках линии MDCK.
Результаты определения онколитической активности аденовирусных штаммов, выраженные через 
lgТЦПД50/мл, представлены в табл. 2. Клетки глиомы 
человека культур U-87MG, GB2m, GA14F и GB22M 
были менее чувствительны к литической инфекции 
аденовирусными штаммами (как к природным «диким» типам аденовируса Ad5 и Ad2, так и к их делеционным по гену Е1В55К вариантам), чем высокочувствительная к аденовирусам культура клеток НЕК293. 
Однако, как следует из приведенных результатов, делеционные варианты Adel2 и Ad2del сохраняли онколитическую активность, близкую к таковой для «диких» 

типов аденовируса в отношении клеток глиомы и в то 
же время имели существенные ограничения по этой 
активности для нетрансформированных клеток человека в сравнении с исходными штаммами. Наиболее 
избирательно чувствительной к аденовирусным штаммам из использованных культур клеток глиом оказалась короткоживущая культура GA14F. Так, например, 
делеционный вариант Adel2 лизировал эти опухолевые 
клетки с эффективностью большей, чем используемые в качестве нормальных нетрансформированные клетки MRC5 и MCF10A, — в 100 и 10 000 раз, 
соответственно. Возможно, повышенный тропизм 
аденовирусов к глиоастроцитомным клеткам связан 
с более эффективным проникновением вируса в эти 
опухолевые клетки. Это может быть обусловлено высоким уровнем презентации на их клеточной поверхности коксаки-аденовирусного рецептора и клеточных интегринов (клеточный рецептор и корецептор 
для аденовирусов человека 5-го и 2-го серотипов, 
соответственно).
Исследование цитолитической активности штаммов 
ЛИВП и WR вируса осповакцины на культурах первичных, диплоидных и опухолевых клеток показало 
(табл. 3), что по сравнению с высокочувствительными 
клетками линии CV-1 и карциномы А431 клетки глиобластомы U-87MG приблизительно в 16,7 и 21,9, а GB2m —
в 13,9 и 16,4 раз менее чувствительны к литической инфекции этих штаммов. Среди культур глиомных клеток 
наибольшая онколитическая активность штаммов ЛИВП 
и WR проявлялась на клетках U-87MG, в то время как 
клетки малопассажной культуры глиомы человека GB2m 
лизировались в 2,4 и 5,8 раз хуже. Вирусы осповакцины 
практически не обладали литической активностью в отношении первичных клеток эпителия молочной железы 
MCF-10A, что свидетельствует о высокой онкоселективности вируса осповакцины.

Таблица 1. Результаты оценки уровня репликации парвовируса собак в клетках опухолей человека

Наименование клеточной 
культуры
Происхождение
клеточной культуры
Время накопления вируса 
в культуре
Наличие цитопатогенной 
дозы (ЦПД)
Титр вируса в реакции 
гемагглютинации
U-87MG
Глиобластома
5 суток
Нет
1:32
GB2m
Глиобластома
5 суток
Нет
1:32
GA14f
Астроцитома
5 суток
Нет
1:32
GB22m
Глиобластома
5 суток
Нет
1:32
MDCK
Перевиваемая линия 
клеток почек собаки
2 суток
ЦПД
1:2560

ФЭЧ-15
Нормальный фенотип
5 суток
Нет
1:2
MRC-5
Нормальный фенотип
5 суток
Нет
1:4

Примечание. Диплоидные культуры ФЭЧ-15 и MRC-5 использовались в качестве сравнительного контроля на эффективность размножения парвовируса в нормальных тканях человека. В наименование культур GB2m, GA14f, GB22m заложена информация 
по четырем основным характеристикам: первая буква G для всех одинакова и означает Glioma; вторая буква имеет отношение к диагнозу: A – Astrocitoma, B – glioBlastoma; на третьей позиции стоит порядковый номер образца; на четвертой позиции буквой обозначен 
пол пациента: m – male, f – female.

Таблица 2. Эффективность онкоселективной репликации аденовирусов в клетках глиом человека

Штаммы 
аденовирусов
Инфекционные титры аденовирусов на клеточных культурах, lg ТЦПД50 /мл
НЕК293
U-87MG
GB2m
GA14f
GB22M
MRC-5
MCF10A
Adel2 
9,0
6,5
6,0
7,0
6,5
5,0
3,0
Ad5
9,0
7,0
6,2
7,3
6,5
6,5
5,0
Ad2del 
9,0
6,5
6,0
7,0
6,2
4,5
3,5
Ad2
9,0
7,0
6,0
7,5
н.о.
6,0
5,0

Примечание. Перед проведением опыта препараты аденовирусов  титровали на клетках НЕК293 и привели к одному титру 
(lg ТЦПД50 /мл- 9,0), н.о. - не определяли.

АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ОНКОЛОГИИ

Обсуждение

Так как использование онколитических вирусов 
является одним из наиболее перспективных направлений в современной противоопухолевой терапии, в последние годы разрабатываются препараты, получаемые 
на основе либо природных и аттенуированных вирусов, либо рекомбинантных вирусов с использованием  
генно-инженерных технологий. Противоопухолевые 
свойства вирусов обусловлены как избирательностью 
заражения опухолевых клеток (онкоселективностью), 
которая проявляется также in vitro в культуре, так 
и большей доступностью и чувствительностью опухолевых клеток in vivo за счет стимуляции вирусами 
противоопухолевого иммунитета и отсутствием природных тканевых барьеров, препятствующих распространению вируса в организме. При создании новых 
онколитических вирусов большое значение уделяется 
именно онкоселективности, которую можно определить в культуре клеток при сравнении репликативных 
свойств вируса на панелях нормальных и опухолевых клеток. Так, онколитические свойства парвовируса 
крыс H1 в отношении глиобластом ранее были подробно изучены в экспериментах in vitro и in vivo [17], 
и в настоящее время препарат ParvOryx, созданный 
на основе парвовируса H1, проходит клинические испытания в Германии с участием пациентов с мультиформной глиобластомой [18]. Исследованный нами 
парвовирус собак проявил in vitro сравнительно невысокое (в 8–16 раз) превышение своей способости 
к репликации на глиомных клетках человека в сравнении с нормальными или нетрансформированными клетками. Отчасти это может быть связано с видовой специфичностью парвовируса собак, хотя более вероятным объяснением может быть известная склонность 
парвовирусов 
реплицироваться 
преимущественно 
в клетках, находящихся на стадии G2 клеточного цикла. Появление таких клеток возможно лишь при условии активной пролиферации, что наблюдается в быстро 
делящихся клетках опухоли. В условиях in vitro в сформировавшихся монослоях, когда большая часть клеток 
уже не делится вследствие контактного ингибирования, 
парвовирусы, по-видимому, не способны поддерживать свою репликацию и обеспечивать выраженный 
цитолитический эффект.
Эффективность противоопухолевой активности ортопоксвирусов обусловлена свойственной для них природной онкоселективностью. Три рекомбинантных штамма 
вируса осповакцины в настоящее время проходят клинические испытания в США в отношении широкого спектра 
опухолей прямой кишки, почек, легких, включая гепатокарциному и меланому [19]. Один из этих штаммов, 
JX-594, показал высокую онколитическую активность 
в отношении глиом при проведении доклинических испытаний [20]. Исследуемые нами штаммы вируса осповакцины ЛИВП и WR из российской коллекции также 
показали онкоселективность в отношении клеток глиом 

человека. Данные штаммы, по-видимому, могут быть использованы в качестве векторов для получения вариантов 
рекомбинантных вирусов с более выраженной и направленной противоопухолевой активностью.
Большая серия работ, посвященная созданию и использованию онколитических вариантов на основе аденовирусов, подробно описана нами ранее [8]. Клинические 
испытания на глиобластомах прошел пока только один 
онколитический препарат ONYX-015 на основе рекомбинантного аденовируса штамма dl1520, способный избирательно реплицироваться в опухолевых клетках. Так, 
ONYX-015 эффективно уничтожал клетки глиомы линии 
U373, имеющие мутацию в гене р53, но не действовал на 
клетки глиобластомы линии U87, не имеющие повреждений в гене  р53. Результаты клинических испытаний 
показали, что препарат не вызывает серьезных побочных 
явлений. У одного пациента наблюдалось прекращение 
роста опухоли, еще у одного скорость роста опухоли 
была замедлена, а три пациента, получившие терапию 
онколитическим вирусом в дозе 109 или 1010 БОЕ, оставались живы к моменту публикации более 19 месяцев [21]. 
В настоящее время препарат H101 (Oncorine) на основе 
штамма dl1520 впервые среди онколитических вирусов 
получил лицензию на применение в Китае [22]. Хотя изначально этот препарат предназначался для лечения глиом, наибольшую эффективность он продемонстрировал 
при терапии рака головы и шеи.
Среди российских разработок необходимо отметить 
препарат Канцеролизин, созданный в Научном центре 
вирусологии и биотехнологии «Вектор» на основе штамма 
Adel2. Так же как и dl1520 (ONYX-015), этот штамм аденовируса дефектен по гену, кодирующему белок E1B-55k 
[11]. Доклинические исследования этого препарата показали его эффективность на культурах клеток и in vivo, 
а клинические испытания показали его безопасность 
и хорошую переносимость пациентами [23]. В настоящее 
время препарат проходит клинические испытания фазы 
II. Онколитическая активность штаммов Adel2 и AD2DEL 
на клетках опухолей головного мозга человека ранее не 
изучалась. Полученные нами данные демонстрируют активное размножение этих рекомбинантных аденовирусов 
на клетках глиобластомы U87, а также в малопассажных 
культурах клеток глиальных опухолей человека, что позволяет надеяться на терапевтическую эффективность 
в случае их применения на больных глиобластомой.

Заключение

Полученные нами короткоживущие или малопассажные культуры клеток глиом человека были использованы для испытания ряда ортопоксвирусов, аденовирусов 
и парвовирусов с целью оценки их онколитической активности in vitro. Была продемонстрирована выраженная 
онкоселективность вирусов в отношении исследованных 
клеток глиом человека, что указывает на перспективность разработанных клеточных моделей для будущих 

Таблица 3. Определение онкоселективной активности штаммов вируса осповакцины в отношении клеток глиом человека

Штаммы
ЦТД50, БОЕ/клетка, на культурах клеток 
А431
CV-1
U-87MG
GB2m
MCF 10A
ЛИВП
0,0042
0,0032
0,07
0,17
> 10
WR
0,0026
0,0022
0,036
0,21
> 10

Примечание. ЦТД50 — доза вируса, лизирующая 50% клеток в лунке 96-луночного планшета через 72 часа после инфицирования. 
Для сравнения использовали высокочувствительные к вирусу осповакцины клеточные линии А431 и CV-1 и клетки MCF10A нормального фенотипа.

ВЕСТНИК РАМН /2013/ № 12

испытаний онколитических вирусов  в рамках создания 
новых подходов к терапии онкологических заболеваний 
человека. Разработанные модели могут быть востребованы также на этапе испытаний онколитических вирусов 
in vivo, на моделях лабораторных животных с привитыми 
ксенотрансплантатами клеток глиальных опухолей человека. По сравнению с установившимися культурами глиом, которые подверглись значительной селекции в ходе 
адаптации к росту в культуре, малопассажные культуры 
глиальных опухолей человека в большей степени отражают свойства опухолевых клеток в организме пациента. 
В связи с этим полученные результаты закладывают но
вую методическую основу для разработки и испытания 
новых РНК- и ДНК-содержащих онколитических вирусов как средств терапии глиом человека.

Благодарности

Работа была частично поддержана грантом Президента 
Российской Федерации НШ-2996.2012.4, Договором  Минобрнауки  № 11.G34.31.0034, грантом программы президиума 
РАН «Молекулярная и клеточная биология»,   грантом РФФИ 
14-04-01323, ГК №14.512.11.0003 , ГК № 14.512.11.0002, интеграционным проектом СО РАН №52.

1. URL: http://www.who.int/gho/ncd/mortality_morbidity/cancer/
en/index.html;  23.11.2013.
2. Ohka F., Natsume A., Wakabayashi T. Neurol. Res. Int. 2012 
(ID 878425); 1–14.
3. Van Meir E.G., Hadjipanayis C.G., Norden A.D., Hui-Kuo Shu., 
Wen P.Y., Olson J.J. CA Cancer J. Clin. 2010; 60 (3): 166–193.
4.  Gubanova N.V., Gaitan A.S., Razumov I.A., Mordvinov V.A., 
Krivoshapkin A.L., Netesov S.V., Chumakov P.M.  Molekulyarnaya 
biologiya – Molecular biology. 2012; 46(6): 1–13.
5. Wollmann G., Ozduman K., van den Pol A.N. Cancer J. 2012; 
18: 69–81.
6. Aksel I.S., Aykan T.B. World Neurol. 1961; 2: 398–405.
7.  Urazova L.N., Kuznetsova T.I. Sibirskii onkologicheskii zhurnal – 
Siberian oncological journal. 2003; 4: 28–35.
8  
Svyatchenko V.A., Tarasova M.V., Netesov S.V., Chumakov P.M. 
Molekulyarnaya biologiya – Molecular biology. 2012; 46(4): 556–
569.
9. Farr-Jones M.A., Parney I.F.,  Petruk K.C. J. Neurooncol. 1999; 
43 (1): 1–10.
10.  Serpinskii O.I., Kochneva G.V., Urmanov I.Kh., Sivolobova G.F., 
Ryabchikova E.I. Molekulyarnaya biologiya – Molecular biology. 
1996; 30: 1064–1073.
11.  Kachko A.V., Svyatchenko V.A., Ternovoi V.A., Kiselev N.N., 
Sorokin A.V., Kiselev S.L., Georgiev G.P., Netesov S.V. 
Molekulyarnaya biologiya – Molecular biology. 2003; 37: 868–875.
12. Parker J.S., Parrish C.R. J. Virol. 1997; 71: 9214–9222.

13. Senda M., Hirayama N., Itoh O., Yamamoto H. J. Gen. Virol. 1988; 
69 (Pt. 2): 349–354.
14. Chanas A.C., Johnson B.K., Simpson D.I. J. Gen. Virol. 1976; 
32: 295–300.
15.  Kirilyuk I.A., Svyatchenko V.A., Morozov D.A., Kazachinskaya E.I., 
Kiselev N.N., Bakunova S.M., Voinov M.A., Loktev V.B., Grigor’ev 
I.A. Antibiotiki i khimioterapiya - Antibiotics and chemotherapy. 2012; 
57(1–2): 3–12.
16. Monks A., Scudiero D., Skehan P., Shoemaker R., Paull K., Vistica D., Hose C., Langley J., Cronise P., Vaigro-Wolff A., GrayGoodrich M., Campbell H., Mayo J. and Boyd M. J. Natl. Cancer 
Inst. 1991; 83 (11): 757–766. 
17.  Geletneky K., Hartkopf A.D., Krempien R. et al. Bioeng. Bugs. 
2010; 1: 429–433.
18.  Geletneky K., Huesing J., Rommelaere J., Schlehofer J.R., Leuchs B., 
Dahm M., Krebs O., von Knebel Doeberitz M., Huber B., Hajda J. 
BMC Cancer. 2012; 12: doi: 10.1186/1471-2407-12-99.
19.  Kochneva G.V., Sivolobova G.F., Yudina K.V., Babkin I.V., 
Chumakov P.M., Netesov S.V. Molekulyarnaya genetika, 
mikrobiologiya i virusologiya – Molecular genetics, nicrobiology and 
virology. 2012; 1: 8–15.
20.  Lun X., Chan J., Zhou H. Mol. Theor. 2010; 18: 1927–1936.
21.  Chiocca E.A., Abbed K.M., Tatter S. Mol. Ther. 2004; 10: 958–966.
22.  Garber K. J. Natl. Cancer. 2006; 98: 298–300.
23.  Vdovichenko G.V., Petrishchenko V.A., Sergeev A.A., Svyatchenko 
V.A. Voprosy virusologii – Issues of virology. 2006; 6: 39–42.

REFERENCES

FOR CORRESPONDENCE
Razumov Ivan Alekseevich, PhD, leading research scientist of the Institute of Cytology and Genetics under Siberian Branch of the Russian 
Academy of Sciences (ICG SB RAS).
Address: 10, Akademik Lavrent’ev Avenue, Novosibirsk, RF, 630090; tel.: +7 (383) 363-49-01 (add. 2208); e-mail: razumov@bionet.nsc.ru 
Svyatchenko Viktor Aleksandrovich, MD, Head of the Laboratory of State Research Center of Virology and Biotechnology “Vector”.
Address: 10, SRCVB “Vector”, Koltsovo, Novosibirsk Region, RF, 630559; tel.: +7 (383) 363-47-53; e-mail: Svyatchenko@vector.nsc.ru
Protopopova Elena Viktorovna, MD, leading research scientist of State Research Center of Virology and Biotechnology “Vector”.
Address: 10, SRCVB “Vector”, Koltsovo, Novosibirsk Region, RF, 630559; tel.: +7 (383) 363-47-53
Kochneva Galina Vadimovna, PhD, Head of the Laboratory of State Research Center of Virology and Biotechnology “Vector”.
Address: 10, SRCVB “Vector”, Koltsovo, Novosibirsk Region, RF, 630559; tel.: +7 (383) 363-47-53; e-mail: kochneva@vector.nsc.ru
Kiselev Nikolai Nikolaevich, senior research scientist of State Research Center of Virology and Biotechnology “Vector”. 
Address: 10, SRCVB “Vector”, Koltsovo, Novosibirsk Region, RF, 630559; tel.: +7 (383) 363-47-53
Gubanova Natal’ya Vladimirovna, MD, research scientist of the Institute of Cytology and Genetics under Siberian Branch of the Russian 
Academy of Sciences. 
Address: 10, Akademik Lavrent’ev Avenue, Novosibirsk, RF, 630090; tel.: +7 (383) 363-49-01; e-mail: nat@bionet.nsc.ru
Shilov Aleksandr Gennad’evich, senior research scientist of the Institute of Cytology and Genetics under Siberian Branch of the Russian 
Academy of Sciences.
Address: 10, Akademik Lavrent’ev Avenue, Novosibirsk, RF, 630090; tel.: +7 (383) 363-49-01; e-mail: alxshilov@mail.ru
Mordvinov Vyacheslav Alekseevich, PhD, Deputy Director of the Institute of Cytology and Genetics under Siberian Branch of the Russian 
Academy of Sciences. 
Address: 10, Akademik Lavrent’ev Avenue, Novosibirsk, RF, 630090; tel.: +7 (383) 363-49-98; e-mail: mordvin@bionet.nsc.ru
Netesov Sergei Viktorovich, professor, correspondent member of RAS, Vice-Principal of Novosibirsk State University. 
Address: 2, Pirogov Street, Novosibirsk, RF, 630090; tel.: +7 (383) 363-40-01
Chumakov Petr Mikhailovich, PhD, professor, Head of the Laboratory of V.A. Engelhardt Institute of Molecular Biology of the Russian 
Academy of Sciences (IMB RAS).
Address: 32, Vavilova Street, Moscow, RF, 119991; tel.: +7 (499) 135-23-31; e-mail: chumakovpm@yahoo.com
Loktev Valerii Borisovich, PhD, professor, Head of the Department of State Research Center of Virology and Biotechnology “Vector”. 
Address: 10, SRCVB “Vector”, Koltsovo, Novosibirsk Region, RF, 630559; tel.: +7 (383) 363-47-53; e-mail: valeryloktev@gmail.com

АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ОНКОЛОГИИ

U.N. Tumanova1, 2, G.G. Karmazanovsky1, 2, E.A. Dubova2, A.I. Shchegolev2

1 Vishnevsky Institute of Surgery, Russian Ministry of Healthcare, Moscow, Russian Federation
2 Academician V.I. Kulakov Research Center of Obstetrics, Gynecology, and Perinatology, Russian Ministry of Healthcare, 
Moscow, Russian Federation

Comparative Analysis of Vascularization Degree of Hepatocellular 
Carcinoma and Focal Nodular Hyperplasia of the Liver According 
to Computed Tomography and Morphological Studies

Objective: A comparative analysis of the degree of vascularization of hepatocellular carcinoma (HCC) and focal nodular hyperplasia (FNG) of the 
liver at carrying out multislice computed tomography (MCT) and morphological studies. Patients and methods: 34 patients operated on for HCC
(19 patients) and FNG of liver (15 patients) were survey. Preoperative we were analyzed four phases of CT-research: native, arterial, venous, 
delayed. Degree of vascularization of tissue were evaluated for immunohistochemical preparations on the relative share of the area of  blood vessels. 
Results: In native phase of the MCT-study HCC was detected as hypodense or izodensnoe education. Growth of the blood CT density depend on the 
type and extent of tumor histological differentiation of cancer. The highest values  are set in the fabric of FNG and moderately differentiated HCC . 
The highest levels of venous growth observed in well differentiated HCC. Indicators of vascularization by CT have maximum values  in the unaffected 
liver parenchyma , and the minimum — in the group of poorly differentiated HCC variant. Conclusions: Use of computed tomography with bolus 
contrast enhancement allows to study the characteristics of blood supply of the liver and focal formations. Frequently only the use of this method 
helps to evaluate specific morphological structure of tumors — hepatocellular carcinoma or focal nodular hyperplasia. As an additional differential 
diagnostic feature is recommended to increase the density determination of tissue formation in the arterial phase computed tomography study. 
The maximum of vascularization by computed tomography and immunohistochemistry (with antibodies CD34) are installed in a tissue of highly 
differentiated hepatocellular carcinoma.
Key words: computed tomography, hepatocellular carcinoma, focal nodular hyperplasia, vascularity, liver.
(Vestnik Rossiiskoi Akademii Meditsinskikh Nauk — Annals of the Russian Academy of Medical Sciences. 2013; 12: 9–15)

У.Н. Туманова1, 2, Г.Г. Кармазановский1, Е.А. Дубова2, А.И. Щёголев2

1 ФГБУ «Институт хирургии им. А.В. Вишневского» Минздрава России, Москва, Российская Федерация
2 ФГБУ «Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова» Минздрава России, 
Москва, Российская Федерация

Сравнительный анализ степени 
васкуляризации гепатоцеллюлярного рака 
и очаговой узловой гиперплазии печени 
по данным компьютерно-томографического 
и морфологического исследований

Цель работы: сравнительный анализ степени васкуляризации гепатоцеллюлярного рака (ГЦР) и очаговой узловой гиперплазии (ОУГ) печени 
при проведении компьютерной томографии (КТ) и морфологического исследования. Пациенты и методы: обследовано 34 больных, оперированных по поводу ГЦР (19 пациентов) и ОУГ печени (15 пациентов). На дооперационном этапе анализировались четыре фазы КТ исследования: нативная, артериальная, венозная, отсроченная. Степень васкуляризации ткани оценивали на иммуногистохимических препаратах 
по  относительной доле площади кровеносных сосудов. Результаты: в нативную фазу исследования ГЦР выявлялся как гиподенсное или 
изоденсное образование. Значения артериального прироста КТ-плотности зависят от вида новообразования и степени гистологической 
дифференцировки рака. Наибольшие значения установлены в ткани ОУГ и умеренно дифференцированного ГЦР. Наибольшие уровни венозного прироста отмечаются при высокодифференцированном раке. Показатели степени васкуляризации по данным КТ имеют максимальные 
значения в непораженной паренхиме печени, а минимальные — в группе низкодифференцированного варианта ГЦР. Выводы: использование 
компьютерной томографии с болюсным контрастным усилением позволяет изучить особенности кровоснабжения очаговых образований 
печени. В качестве дополнительного дифференциально-диагностического признака рекомендуется определение прироста плотности ткани 
образования в артериальную фазу компьютерно-томографического исследования. Максимальные значения степени васкуляризации по данным компьютерной томографии и иммуногистохимического исследования  установлены в ткани высокодифференцированного ГЦР.
Ключевые слова: компьютерная томография, гепатоцеллюлярный рак, очаговая узловая гиперплазия, васкуляризация, печень.
(Вестник РАМН. 2013; 12: 9–15)

ВЕСТНИК РАМН /2013/ № 12

Введение

Процессы ангиогенеза играют ключевую роль при 
многих патологических состояниях и заболеваниях. Особое значение новообразование и рост микрососудов приобретают при опухолевых поражениях. С одной стороны, 
процессы опухолевого неоангиогенеза определяют размеры опухолевого узла, способность к инвазивному росту 
и метастазированию [1]. С другой стороны, показатели 
степени и характер васкуляризации могут использоваться 
для диагностики новообразований и назначения таргетной антиангиогенной терапии [2–4].
Достаточно эффективным методом неинвазивной 
диагностики считается  компьютерная томография (КТ) 
с контрастным усилением путем внутрисосудистого введения рентгеноконтрастных препаратов. В этом случае 
анализ томограмм проводится в нативную, артериальную, 
венозную (портальную) и отсроченную (интерстициальную) фазы, что позволяет изучить изменения денситометрических показателей, получить информацию об 
особенностях васкуляризации и определить тем самым 
гипер- и гиповаскулярные образования [5–7].
Вместе с тем до настоящего времени существует проблема дифференциальной диагностики в группах гиперваскулярных и гиповаскулярных образований. В частности, среди гиперваскулярных образований печени это 
относится к очаговой узловой гиперплазии (ОУГ, focal 
nodular hyperplasia) и гепатоцеллюлярному раку (ГЦР). 
Больные с ОУГ, как правило, подлежат динамическому 
наблюдению с использованием лучевых методов исследования [8]. В случае ГЦР тактика лечения (химиотерапия, 
резекция, трансплантация) зависит от стадии заболевания [9–11].
Цель исследования: сравнительный анализ степени 
васкуляризации ГЦР и ОУГ печени при проведении КТ 
и морфологического исследования.

Пациенты и методы

Участники исследования
Обследовано 34 больных, находившихся на лечении 
и оперированных в Институте хирургии им. А.В. Вишневского по поводу гепатоцеллюлярного рака (19 пациентов 
в возрасте 18–72 лет, средний возраст 45 лет) и очаговой 
узловой гиперплазии печени (15 пациентов в возрасте 
14–68 лет, средний возраст 41 год).

Методы исследования
На дооперационном этапе всем больным проводилась мультиспиральная компьютерная томография
с болюсным контрастным усилением на аппарате Philips 
Brilliance 64 CT. Инъекция как контрастного препарата, 
так и физиологического раствора проводилась с помощью 
двухголовчатого автоматического инжектора OptiVantage 
DH (Mallinckrodt; Inc) со скоростью 4 мл/с. Для запуска сканирования использовался программный пакет 
«bolus tracking» («погоня за болюсом»). Анализировались 
четыре фазы: нативная, артериальная, венозная, отсроченная. Для получения артериальной и венозной фаз 
исследования сканирование начинали, соответственно, 
через 10 и 30 секунд от момента достижения порогового 
контрастирования аорты. Отсроченную фазу проводили 
у всех пациентов через 4–5 мин после введения контрастного препарата. На полученных КТ-сканах определяли 
локализацию, размеры, границы патологического образования, а также денситометрические показатели тка
ни образования, окружающей паренхимы печени, аорты 
в области чревного ствола и воротной вены в области 
ее бифуркации.
На основании полученных денситометрических показателей в разные фазы сканирования рассчитывали 
значения артериального (АП) и венозного (ВП) приростов плотности образования. Артериальный прирост 
определяли как разность КТ-плотностей образования 
в артериальную и нативную фазы. Венозный прирост 
рассчитывали как разность КТ-плотностей образования 
в артериальную и венозную фазы с учетом коэффициента разницы концентрации прироста (КРКП) по аорте 
в области отхождения от нее чревного ствола и воротной 
вене на уровне ее конфлюенса в воротах печени. Отрицательные значения ВП свидетельствовали об отсутствии 
дополнительного притока крови и, соответственно, наличии оттока контрастного вещества из новообразования 
в венозную фазу. В этих случаях разницу КТ-плотностей 
в артериальную и венозную фазу расценивали как нулевую. Использование КРКП позволяет математически нивелировать разницу концентраций контрастного вещества 
в приносящих кровеносных сосудах (аорте и воротной 
вене) и соответственно определить истинное значение КТ 
показателя васкуляризации печени и новообразования. 
Коэффициент рассчитывается как отношение значений 
концентрации контрастного вещества (по степени прироста плотности) в аорте в артериальную фазу к значениям 
концентрации в воротной вене в венозную фазу.
КТ-показатель степени васкуляризации образования, 
соответствующий сумме значений артериального и венозного приростов, отражает уровень накопления контрастного препарата, поступающего по печеночной артерии и воротной вене, а следовательно, позволяет судить 
об общем количестве притекающей крови.
Полученный после резекции печени операционный 
материал подвергали комплексному макро- и микроскопическому исследованию. Гистологическое исследование проводили на парафиновых срезах, окрашенных 
гематоксилином и эозином. В зависимости от степени гистологической дифференцировки [12] наблюдали 
3 группы пациентов: с  высокодифференцированным 
(ВД) (6 пациентов), умеренно дифференцированным 
(УД) (10) и низко дифференцированным (НД) (3) ГЦР.
Выявление кровеносных сосудов на гистологических 
препаратах непораженной печени и ОУГ проводили при 
помощи окраски гематоксилином и эозином, ГЦР и ОУГ — 
иммуногистохимическим методом при помощи готовых 
к употреблению моноклональных мышиных антител 
к CD34 (клон QBEnd/10) и полимерной системы детекции производства Spring Bioscience. Предварительную демаскировку антигена проводили путем кипячения образцов в растворе цитратного буфера с pH 6.0, блокирование 
эндогенной пероксидазы — путем обработки срезов 0,3% 
раствора перекиси водорода в течение 15 мин. В качестве 
фонового красителя использовали гематоксилин.
Степень васкуляризации ткани (относительная доля 
площади кровеносных сосудов в поле зрения) определялась путем морфометрического анализа препаратов 
при помощи системы анализа изображения на базе микроскопа Аxio Imager M1 с использованием программы 
AxioVision (Carl Zeiss).

Статистическая обработка данных
Статистическая обработка результатов проводилась 
с использованием программного пакета Statistica 6.0. Рассчитывали среднее значение (М), стандартное отклонение (SD), ошибку среднего (m). Достоверность различия 

АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ОНКОЛОГИИ

оценивали с помощью теста Манна–Уитни. Различия 
считали статистически значимыми при p<0,05.

Результаты

При КТ-исследовании характеристики новообразования и паренхимы печени, а также сосудов (аорты 
и воротной вены), кровоснабжающих печень, зависят от 
фазы исследования. В нативную фазу исследования ГЦР 
выявлялся как гиподенсное или изоденсное образование 
(рис. 1а). У 17 из 19 пациентов структура новообразования 
была преимущественно неоднородной за счет наличия гиподенсных участков неправильной формы, соответствующих зонам некроза и кровоизлияний. Характерными 
КТ-признаками ОУГ печени в нативную фазу являлись 
достаточно четкие контуры и изоденсность печеночной 
паренхимы (рис. 1б). У ряда больных в структуре образования наблюдался центральный рубец в виде зоны пониженной плотности в основном звездчатой формы.
После введения контрастного вещества в артериальную фазу исследования отмечалось повышение КТплотности как образований, так и паренхимы печени 
по сравнению с нативной фазой (рис. 2а, б). При этом 
степень повышения отличалась в группах с ГЦР различной степени гистологической дифференцировки и ОУГ
(табл. 1). Наиболее высокие значения артериального 
прироста КТ-плотности установлены нами в ткани ОУГ, 
превышающие аналогичные показатели паренхимы печени в 3,6 раза (р<0,01). Средние значения артериаль
ного прироста в ткани ГЦР также превышали показатели артериального прироста печени. Более высокий 
артериальный прирост КТ-плотности зарегистрирован 
в ткани умеренно дифференцированного ГЦР, где он 
был выше показателей высокодифференцированного варианта на 55,8% и низкодифференцированного рака – 
на 47,7%.
Максимальные значения венозного прироста КТплотности наблюдаются в непораженной паренхиме печени. При этом венозный прирост больше артериального 
в 3,4 раза (р<0,01). В то же время в ткани ОУГ отсутствует 
повышение КТ-плотности в венозную фазу исследования. Подобное обусловлено тем, что кровоснабжение и, 
соответственно, поступление контрастного вещества происходит исключительно по ветвям печеночной артерии.
Средние значения венозного прироста в ткани ГЦР 
значительно варьируют в зависимости от степени гистологической дифференцировки опухоли. Наибольшие 
уровни данного прироста установлены в наблюдениях 
высокодифференцированного рака, превышающие соответствующие показатели умеренно и низкодифференцированного вариантов ГЦР в 1,9 и 5,5 раз (р<0,01). Но при 
этом он остается ниже венозного прироста КТ-плотности 
паренхимы печени на 32,3%. Также обращает на себя 
внимание, что в ткани высокодифференцированного 
ГЦР венозный прирост больше артериального на 38,7%. 
Напротив, в наблюдениях умеренно и низкодифференцированного ГЦР артериальный прирост КТ-плотности 
превышает венозный в 2,1 и 4,2 раза, соответственно 
(р<0,05).

Таблица 1. Компьютерно-томографические показатели артериального прироста (АП), венозного прироста (ВП) и степени васкуляризации (В) в ткани печени, ОУГ и ГЦР разной степени дифференцировки (M±m, ед. Н)

Показатель
Печень
ОУГ
ГЦР
ВД
УД
НД
АП
18,9±2,8
68,9±7,9
31,0±5,2
48,3±7,1
32,7±7,5
ВП
63,5±6,7
0
43,0±13,8
23,1±7,8
7,8±3,9
В
82,4±6,9
68,9±7,9
74,0±10,7
71,4±9,3
40,5±5,6

Примечание. ВД — высокодифференцированный, УД — умеренно дифференцированный, НД — низкодифференцированный рак.

Рис. 1. Компьютерно-томографическая картина ГЦР (а) и ОУГ (б) в нативную фазу исследования.

а
б

ВЕСТНИК РАМН /2013/ № 12

Рассчитанные нами средние показатели степени васкуляризации по данным КТ имеют максимальные значения в непораженной паренхиме печени, а минимальные – в группе низкодифференцированного варианта 
ГЦР (рис. 3). Показатель степени васкуляризации ткани 
высокодифференцированного ГЦР ниже (на 10,1%) по 
сравнению с паренхимой печени. В ткани ОУГ степень 
васкуляризации меньше соответствующих значений непораженной паренхимы печени, высоко-, и умеренно 
дифференцированного ГЦР и превышает показатели низкодифференцированного (на 70,1%) варианта ГЦР.
При анализе соотношений артериального и венозного приростов в формировании показателя степени 
васкуляризации видно, что в нормальной ткани печени оно составляет 1:3,4. Подобные значения в целом 
соответствуют данным литературы, свидетельствующим 
о том, что по воротной вене в печень поступает порядка 
70% от общего объема притекающей крови. Это составляет примерно 1500 мл/мин, или 20% от сердечного выброса. Остальные 30% крови притекает по печеночной
артерии. 
Для ткани ОУГ, как мы уже указывали, характерен 
только артериальный прирост. В наблюдениях высокодифференцированного ГЦР средние значения артериального прироста меньше венозного и составляют 41,9% 
от общего значения показателя васкуляризации. В ткани 
умеренно дифференцированного варианта и особенно 
низкодифференцированного ГЦР преобладает артериальный прирост, средние значения которого составляют, 
соответственно, 67,6 и 80,7% от общего.
Вместе с тем при анализе отдельных наблюдений 
обращают на себя внимание индивидуальные различия 
значений артериального и венозного приростов к ткани 
изученных новообразований (рис. 4). Показатели артериального прироста в ткани ОУГ варьируют от 33 ед. Н 
до 106 ед. Н. Выраженность притоков крови к ГЦР зависит, как мы уже указывали, от степени гистологической 
дифференцировки. Наибольшие колебания отмечаются 
в наблюдениях умеренно дифференцированного рака, 
наименьшие – при низкодифференцированном ГЦР. Показатели венозного прироста в большей степени варьи
Рис. 2. Компьютерно-томографическая картина ГЦР (а) и ОУГ (б) в артериальную фазу исследования.

а
б

140

120

100

80

60

40

20

0
Печень 
ОУГ 
ВДГЦР 
УДГЦР 
НДГЦР

%

Рис. 3. Компьютерно-томографические показатели степени васкуляризации ткани печени, ОУГ и ГЦР разной степени дифференцировки. Показатели ОУГ приняты за 100%.

120

100

80

60

40

20

0
ОУГ 
ВД 
ГЦР 
УД 
ГЦР 
НД 
ГЦР

ед. Н

Рис. 4. Колебания артериального (красный цвет) и венозного 
(синий цвет) приростов к ОУГ и ГЦР разной степени дифференцировки по данным КТ. 

АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ОНКОЛОГИИ

руют в ткани высокодифференцированного рака, в меньшей – в наблюдениях низкодифференцированного ГЦР.
Характеризуя гистологические препараты операционного материала, следует отметить, что синусоиды 
в периопухолевой ткани печени достаточно четко выявляются при окраске гематоксилином и эозином. 
В результате морфометрического анализа средние значения показателя степени васкуляризации паренхимы 
печени, характеризующего относительную площадь сосудов в поле зрения, составили 8,2%. На препаратах 
ткани ГЦР, окрашенных гематоксилином и эозином, 
визуализация сосудов значительно затруднена (рис. 5а), 
поэтому их выявление проводили иммуногистохимическим методом с использованием антител к CD34 – 
маркеру эндотелиальных клеток (рис. 5б). Максимальный уровень (18,7%) степени васкуляризации 
в ткани опухоли при морфометрическом анализе установлен нами при ВД варианте. В ткани УД и НД ГЦР 
показатели степени васкуляризации ниже на 33,7 и 41,2%, 
соответственно.
Площадь просвета синусоидов в ткани ОУГ определяли как на гистологических (рис. 5в), так и на иммуногистохимических препаратах (рис. 5г). В результате 
установлено, что степень васкуляризации при иммуногистохимическом выявлении синусоидов (8,5%) выше та
ковой при окраске гематоксилином и эозином (4,2%). 
В целом характер распределения гистологических форм 
изученных новообразований по степени васкуляризации (рис. 6) соответствует вышеописанным изменениям 
максимальных приростов КТ-плотности.
Таким образом, наиболее высокие показатели степени васкуляризации по данным КТ и морфологического 
исследования установлены нами в ткани высокодифференцированного ГЦР. Несколько ниже его значения были 
в периопухолевой паренхиме печени. В этой связи следует 
отметить, что, согласно данным Yu с соавт. [13], в участках 
печени, прилежащих к злокачественному новообразованию, отмечается выраженная активация прогениторных 
эндотелиальных клеток и процессов неоангиогенеза.
Наиболее низкие значения степени васкуляризации 
в наблюдениях рака отмечались при низкодифференцированном ГЦР, показатели умеренно дифференцированного варианта занимали промежуточное положение. Вероятно, подобные изменения свидетельствуют 
о замедлении процессов неоангиогенеза при снижении 
степени гистологической дифференцировки и увеличении степени злокачественности опухоли. Подтверждением подобного суждения являются отмеченные 
нами при морфологическом изучении участки некроза 
в ткани низкодифференцированного ГЦР.

а
б

а
б

Рис. 5. Гистологические и иммуногистохимические изменения в ткани ГЦР (а, б) и ОУГ (в, г). а, в – окраска гематоксилином и эозином, б, г – экспрессия CD34, иммунопероксидазный метод; ув. а, б – ×400, в, г – ×100.