Экспериментальная фармакогенетика циклофосфамида: автореферат

УЧРЕЖДЕНИЕ РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ НАУК 

 
ЦЕНТР ТЕОРЕТИЧЕСКИХ ПРОБЛЕМ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКОЙ 
ФАРМАКОЛОГИИ РАН 
 
 
 
 
На правах рукописи 
 
УДК 615.454.2 
 
ТЕЛЕГИН 
Леонид Юрьевич 
 
 
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ФАРМАКОГЕНЕТИКА 
ЦИКЛОФОСФАМИДА 
 
 
(14.03.06 – Фармакология, клиническая фармакология) 
 
 
 
 
 
А в т о р е ф е р а т 
диссертации на соискание учёной степени 
доктора медицинских наук 
 
 

 

 

 

 

 

 

 

Москва — 2010 
 
 

 

 

 

 

Диссертационная работа выполнена в Учреждении 
Российской 
академии 
наук Центре теоретических проблем физико-химической фармакологии РАН 
 
 
 
Научные консультанты: 
 
доктор медицинских наук 
 
 
 
 
 
 
Владимир Митрофанович Писарев 
 
 
 
 
 
 
 
академик РАН, профессор 
 
 
 
 
 
 
Лев Арамович Пирузян 
 
 
Официальные оппоненты: 
 
доктор медицинских наук, профессор 
 
 
 
 
 
 
Владимир Михайлович Бухман 
 
 
 
 
 
 
 
доктор биологических наук, профессор 
 
 
 
 
 
 
Николай Николаевич Золотов 
 
 
 
 
 
 
 
доктор биологических наук 
 
 
 
 
 
 
Виктор Александрович Суханов 
 
Ведущая организация:  
 
Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Московский государственный медико-стоматологический университет Федерального агентства 
по здравоохранению и социальному развитию" 
 
 
 
Защита диссертации состоится 15 апреля 2011 г. в 11.00 часов на заседании 
диссертационного совета Д.002.252.01 при Учреждении Российской академии 
наук Центр теоретических проблем физико-химической фармакологии РАН по 
адресу: 119991, Москва, ГСП-1, ул. Косыгина, д. 4. 
 
 
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Учреждения Российской 
академии наук Центр теоретических проблем физико-химической фармакологии РАН. 
 
 
Автореферат разослан ___ декабря 2010 года 
 
 
Ученый секретарь диссертационного совета, 
доктор медицинских наук 
 
 
 
 
 
И. 
С. 
Николаева

 

 

- 1 
 

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ 

 

Актуальность проблемы. Тема настоящего исследования тесно переплетается с 

одной из ведущих задач Центра теоретических проблем физико-химической фармаколо
гии РАН – определение метаболического статуса человеческого организма (Л. А. Пиру
зян, 2004) для реализации принципа индивидуализации лекарственной терапии и, в част
ности, иммунодепрессивной терапии. Широкое использование иммунодепрессантов ста
вит перед клиницистами задачу оценить индивидуальную, наследственно обусловленную 

чувствительность (резистентность) к лекарственному воздействию. Очевидно, что для 

решения этой задачи, прежде всего, необходимы целенаправленные экспериментальные 

исследования. 

Вопрос о значении наследственных факторов в определении степени иммуноде
прессии, возникающей под влиянием химиопрепаратов-иммунодепрессантов, ранее сис
тематически исследовался экспериментальной группой лаборатории иммуногенетики 

Института медицинской генетики АМН СССР.  

Всё началось с экспериментального факта, обнаруженного Львом Алексеевичем 

Певницким в процессе работы над докторской диссертацией (Л. А. Певницкий, 1974) – 

наличие межлинейных различий у мышей в степени лекарственно индуцируемой имму
нологической толерантности. Это состояние специфической иммунологической ареак
тивности (неотвечаемости) возникает в результате сочетанного введения в организм экс
периментального животного огромной дозы антигена (тем самым активируется весь им
мунокомпетентный клон) и лекарственного препарата-иммунодепрессанта, приводящего 

к элиминации активированного антигеном клона клеток иммунной системы (так назы
ваемая, клональная форма толерантности, см. Л. Н. Фонталин и Л. А. Певницкий, 1978). 

Данное состояние специфично – сохраняется полноценный иммунный ответ на другие 

антигены. Наилучшие результаты были получены у мышей при использовании в качест
ве антигена эритроцитов барана (ЭБ), в качестве иммунодепрессанта – циклофосфамида 

(ЦФ). Длительность состояния полученной таким образом иммунологической толерант
ности сохранялась до 1 года (почти половина мышиной жизни).  

Нами первоначально был изучен вопрос о существовании подобных межлинейных 

различий у мышей в степени подавления ЦФ первичной иммунной реакции на оптималь
ную иммуногенную дозу ЭБ. В широком диапазоне доз иммунодепрессанта мы выявили 

линии 
мышей, 
контрастно 
реагирующих 
на 
иммунодепрессивное 
воздействие: 

 
- 2 
BALB/cJLacSto (резистентная линия) и DBA/2JSto (чувствительная линия) (Л. А. Пев
ницкий, Л. Ю. Телегин, В. Н. Большев, 1977). 

При анализе причин обнаруженных различий мы установили, что иммунологиче
ские механизмы здесь играют подчинённую роль: сопоставление нормальной реакции 

мышей разных генотипов на антиген и степени относительной иммунодепрессии показа
ло, что между этими параметрами связи нет. Так, например, при использовании ЭБ в дозе 

5×108 клеток высота иммунного ответа в контроле была практически одинаковой у мы
шей исследуемых линий, тогда как показатели относительной иммунодепрессии сущест
венно различались. Следует также отметить, что гены комплекса H-2, по-видимому, не 

определяют чувствительность (резистентность) к препарату, поскольку мыши контраст
ных 
генотипов 
BALB/c 
и 
DBA/2 
имеют 
одинаковый 
H-2-гаплотип 
– 
H-2d 

(http://jaxmice.jax.org/strain/000651.html и http://jaxmice.jax.org/strain/000671.html). Причи
ну межлинейных различий при иммунодепрессии и иммунологической толерантности 

следовало 
искать 
в 
особенностях 
поведения 
лекарственного 
препарата
иммунодепрессанта в организме мышей разных генотипов.  

Мы исследовали (Л. Ю. Телегин, 1981) следующие маркёрные признаки фармако
кинетики и фармакодинамики ЦФ в организме мышей разных линий: особенности мета
болизма ЦФ в микросомах клеток печени; фармакокинетику содержания в сыворотке 

крови активных алкилирующих метаболитов ЦФ; иммунодепрессивное действие на тест
клетки ЦФ, активированного in vitro ("активный" постмикросомальный супернатант) и in 

vivo ("активная сыворотка"); чувствительность иммунокомпетентных клеток селезёнки к 

иммунодепрессивному влиянию "активной сыворотки". 

В результате проведённых исследований было установлено, что для мышей "рези
стентного" генотипа BALB/c по сравнению с мышами "чувствительной" линии DBA/2 

была характерна более высокая скорость метаболизма ЦФ в печени, большее содержание 

активных алкилирующих метаболитов в крови, но меньшая чувствительность иммуно
компетентных клеток-мишеней селезёнки. В процессе проведения опытов был обнару
жен ранее неизвестный факт отсутствия параллелизма между содержанием активных ал
килирующих продуктов метаболизма ЦФ в образцах "активной сыворотки" и её иммуно
депрессивным действием в отношении тест-клеток. Тогда была высказана гипотеза, объ
ясняющая это явление, – усиление интактным ЦФ действия своих активных метаболитов 

– и она нуждалась в экспериментальной проверке. 

Цель и задачи исследований. Настоящее диссертационное исследование является 

логическим продолжением ранее проведённых нами работ. Дальнейшее выяснение меха

 
- 3 
низмов действия и особенностей поведения в организме циклофосфамида, объясняющих 

генетические различия в реакции на этот лекарственный препарат, явилось целью на
стоящей работы. Для достижения поставленной цели необходимо было решить следую
щие задачи: 

1. Выяснить, сохранятся ли подобные соотношения между мышами линий 

BALB/c и DBA/2 при использовании в качестве иммунодепрессантов лекарст
венных препаратов иной структуры и механизма действия (сарколизин, тио
фосфамид, цитозинарабинозид, циклоспорин A). 

2. Исследовать сравнительную чувствительность иммунокомпетентных клеток
мишеней (T- и B-клеток селезёнки) мышей линий BALB/c и DBA/2 к иммуно
депрессивному действию ЦФ in vitro. 

3. Изучить чувствительность лимфоцитов периферической крови человека к дей
ствию ЦФ и тиофосфамида, определить степень изменчивости этого признака, 

выделить разные типы реакции на химиопрепараты (высоко- и низкореаги
рующие индивидуумы) и исследовать возможные механизмы различий в чув
ствительности к иммунодепрессантам. 

4. Изучить особенности острого токсического действия ЦФ у мышей BALB/c и 

DBA/2, обладающих контрастной чувствительностью к иммунодепрессивному 

действию ЦФ (активность некоторых ферментов метаболизма ЦФ, кинетика 

токсического метаболита ЦФ, акролеина, кинетические показатели содержания 

свободных сульфгидрильных групп). 

5. Определить уровень репликативного и репаративного синтеза ДНК в сплено
цитах интактных мышей BALB/c и DBA/2 как возможного фактора, опреде
ляющего разную чувствительность клеток-мишеней мышей данных генотипов 

к действию ЦФ. 

6. В разных экспериментальных условиях подробно исследовать ранее не уста
новленный механизм биологического действия ЦФ, проверив выдвинутую ра
нее нами гипотезу (Л. Ю. Телегин, 1981) об усилении нативным ЦФ действия 

собственных активных метаболитов. 

Положения, выносимые на защиту: 

1. Разработан фармакогенетический подход для выяснения причин разной чувст
вительности к действию циклофосфамида. 

2. Мыши двух линий, для которых характерна неодинаковая чувствительность к 

иммунодепрессивному действию циклофосфамида in vivo (BALB/cJLacSto –