ПАРАМЕТРЫ БИОИМПЕДАНСНОЙ СПЕКТРОСКОПИИ ОТМЫТЫХ И ОБРАБОТАННЫХ ТРИПСИНОМ ЭРИТРОЦИТОВ

 
ВЕСТНИК УДМУРТСКОГО УНИВЕРСИТЕТА 
29 
БИОЛОГИЯ. НАУКИ О ЗЕМЛЕ 
 
2010. Вып. 3 

 
УДК 577.3 
 
М.В. Малахов 
 
ПАРАМЕТРЫ БИОИМПЕДАНСНОЙ СПЕКТРОСКОПИИ ОТМЫТЫХ И ОБРАБОТАННЫХ 
ТРИПСИНОМ ЭРИТРОЦИТОВ 
 
Изучены параметры биоимпедансной спектроскопии (БИС) суспензий неотмытых, отмытых и обработанных 
трипсином эритроцитов. Электрические измерения суспензий проводились на аппарате ABC-01 «Медасс». Установлено, что изменения параметров БИС после отмывки обусловлены структурными изменениями мембран 
эритроцитов, а после инкубации с трипсином – сближением эритроцитов, увеличением их объёма и изменением 
однородности суспензий.  
 
Ключевые слова: биоимпедансная спектроскопия, отмывка эритроцитов, трипсин, мембрана эритроцита. 
 
Одним из методов оценки показателей крови является биоимпедансная спектроскопия (БИС) 
[1]. Метод БИС позволяет определить гематокрит [2; 3], содержание гемоглобина, концентрацию 
эритроцитов [4]. Следует отметить, что на параметры БИС крови существенное влияние оказывает 
адсорбция белков плазмы на поверхности форменных элементов [5; 6], что уменьшает точность определения гематологических показателей методом БИС.   
Известно, что на мембране эритроцитов находится слой сиаловых кислот, который обусловливает поверхностный отрицательный заряд красных клеток крови. Заряд на поверхности эритроцитов 
влияет на адсорбцию белков на их мембране, а также на агрегацию форменных элементов [7; 8]. Показатели БИС крови связаны с процессом агрегации эритроцитов [6]. Таким образом, поскольку устранение отрицательного заряда с мембраны эритроцитов приводит к усилению процесса агрегации и 
уменьшению адсорбции некоторых белков, можно предположить, что обработка эритроцитов трипсином вызовет изменение показателей БИС крови. Уменьшение количества белков на мембране 
эритроцитов, вероятно, приведёт к снижению сопротивления и ёмкости мембран. В доступной нам 
литературе исследований, посвящённых электрическим свойствам обработанных трипсином эритроцитов, нет. Вместе с тем изучение этого вопроса представляет интерес.   
Целью нашего исследования было выяснить, как влияют адсорбированные на мембране эритроцитов белки на параметры БИС эритроцитарных суспензий, а также установить, как изменяются 
показатели биоимпедансной спектроскопии суспензий красных клеток крови в результате устранения 
отрицательного заряда с мембраны эритроцитов.    
 
Материалы и методика исследования 
 
Приготовление суспензий эритроцитов. Были приготовлены концентрированные суспензии 
неотмытых, отмытых и обработанных трипсином эритроцитов. Образцы венозной крови (n=8) объёмом 
9 мл центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 мин на центрифуге ОПн-8, затем надосадочную 
жидкость полностью удаляли. Полученную суспензию эритроцитов делили на 3 равные порции. Первую порцию использовали для измерений как неотмытые эритроциты, а вторую и третью отмывали 
трёхкратным центрифугированием по 10 мин при 3000 об/мин в 6 мл 0,9%-го раствора хлорида натрия. 
После третьего центрифугирования надосадочную жидкость полностью удаляли. Затем вторую порцию 
суспензии использовали для измерений как отмытые эритроциты, а третью инкубировали в растворе 
трипсина (10 мг кристаллического трипсина в 6 мл 0,9% -го раствора NaCl) в течение часа. После инкубации с трипсином эритроциты вновь отмывались трёхкратным центрифугированием в 0,9%-м растворе хлорида натрия, как было описано выше. Затем надосадочную жидкость полностью удаляли и использовали третью порцию для измерений как обработанные трипсином эритроциты. 
Гематокрит (Ht) всех суспензий эритроцитов контролировался центрифугированием в гематокритном капилляре при 5000 об/мин в течение 10 мин.  
Биоимпедансная спектроскопия. Электрические измерения суспензий эритроцитов выполнялись при комнатной температуре (21+1оС) на биоимпедансном анализаторе «АВС-01 Медасс» в диапазоне частот 5 – 500 кГц. Исследуемые образцы объёмом 1 мл помещали в измерительную камеру, 
которая представляет собой пластиковую трубку с двумя парами потенциальных и токовых электродов. Методика измерения подробно описана в нашей предыдущей работе [4]. С использованием про
PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com